分子病理技术_hidden_实践面试_hidden_常见_hidden_问题与答案.docxVIP

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分子病理技术hidden实践面试hidden常见hidden问题与答案

一、基础知识题（共5题，每题2分）

1.题：简述免疫组化（IHC）的基本原理及其在分子病理诊断中的应用场景。

答：免疫组化（IHC）的基本原理是利用特异性抗体与组织切片中的目标抗原结合，通过显色反应在显微镜下观察抗原分布。其应用场景包括：肿瘤标志物检测（如HER2、Ki-67）、靶向治疗药物选择（如EGFR突变检测）、肿瘤分期与预后评估等。

2.题：什么是荧光原位杂交（FISH）技术？它在检测染色体异常中有何优势？

答：荧光原位杂交（FISH）是利用荧光标记的核酸探针与染色体DNA结合，通过荧光显微镜观察特定基因或染色体片段的定位。其优势在于可直观显示染色体数目与结构异常（如染色体易位、缺失），且操作相对快速，适用于临床即时诊断。

3.题：逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）在肿瘤分子检测中的作用是什么？

答：RT-PCR通过逆转录将RNA转化为cDNA，再进行PCR扩增，用于检测肿瘤特异性基因表达（如mRNA水平）。其灵敏度高，适用于微小残留病灶（MRD）监测、靶向药物疗效评估等。

4.题：什么是液体活检？它与组织活检相比有哪些优势？

答：液体活检是通过检测血液、尿液等体液中的肿瘤细胞或循环肿瘤DNA（ctDNA）进行诊断。相比传统组织活检，其优势在于无创、可重复采样、实时监测肿瘤动态变化，尤其适用于早期筛查和复发监测。

5.题：分子病理报告中的“基因扩增”通常指哪种检测方法？

答：基因扩增通常指荧光定量PCR（qPCR）或数字PCR（dPCR）检测，用于量化基因（如MYC、EGFR）的拷贝数变异（CNV），是评估靶向药物敏感性的重要指标。

二、技术操作题（共8题，每题3分）

6.题：在IHC实验中，如何避免非特异性染色？

答：避免非特异性染色的方法包括：①优化抗体稀释浓度；②使用封闭剂（如牛血清白蛋白）封闭内源性过氧化物酶；③设置阴性对照（无抗体孵育）；④使用已知阳性对照验证抗体特异性。

7.题：FISH检测中，如何判断探针杂交失败？

答：探针杂交失败的判断依据包括：①杂交信号缺失或非常弱；②背景荧光过高；③探针滞留未结合。需检查探针质量、固定剂浓度及杂交条件（温度、时间）是否合理。

8.题：RT-PCR实验中，如何检测PCR扩增效率？

答：通过绘制标准曲线（不同拷贝数模板的Ct值）计算扩增效率（理想值为100%）。若效率低于90%，需优化退火温度、引物浓度或Mg2?浓度。

9.题：液体活检中，ctDNA提取的常用方法有哪些？

答：常用方法包括：①磁珠富集法（利用抗体捕获肿瘤细胞或ctDNA）；②硅胶膜过滤法（通过尺寸筛选ctDNA）；③外泌体靶向捕获法（特异性结合外泌体上的ctDNA）。

10.题：如何评估免疫组化评分的可靠性？

答：可靠性评估方法包括：①双盲法阅片；②高分辨率图像分析系统；③与金标准（如FISH）对比验证。评分者需接受标准化培训以减少主观误差。

11.题：数字PCR在检测肿瘤基因mRNA表达中的应用要点是什么？

答：关键要点包括：①高精度量化低丰度基因；②无偏倚扩增（每个样本独立分区）；③适用于MRD监测和基因表达差异研究。需注意引物设计需避免非特异性结合。

12.题：为什么液体活检的ctDNA检测需要设置内对照？

答：内对照（如GAPDH、APRT）用于校正游离DNA降解程度和采样误差，确保ctDNA定量结果的准确性。若内对照信号过低，可能提示样本处理不当。

13.题：在FISH检测中，如何区分假阳性信号？

答：假阳性信号需排除以下情况：①探针非特异性结合（如重复序列区域）；②荧光淬灭剂残留；③切片固定过度（DNA交联过强）。需对比未标记探针对照。

三、临床应用题（共7题，每题4分）

14.题：HER2检测在乳腺癌治疗中如何指导用药？

答：HER2阳性乳腺癌（IHC3+或FISH扩增）患者适合曲妥珠单抗等靶向治疗，显著提高生存率。IHC1+/2+需结合FISH确认是否需辅助靶向治疗。

15.题：如何通过分子病理评估肺癌患者的免疫治疗适用性？

答：PD-L1表达检测（IHC或FISH）是关键指标。此外，肿瘤突变负荷（TMB）和MSI-H状态（通过测序检测）也影响免疫治疗疗效预测。

16.题：胆管癌中K-ras突变的检测意义是什么？

答：K-ras突变（如G12D）与吉非替尼等EGFR-TKIs耐药相关，但部分KRAS抑制剂（如sotorasib）对特定突变有效。检测可指导靶向药物选择。

17.题：液体活检在消化道肿瘤复发监测中的作用？

答：通过ctDNA检测可早期发现肿