细菌病实验室检测流程.pptxVIP

初诊：根据流行病学、症状、病变等方面的疾病特征，做出初步诊断。;病料的采集、保存和运送

细菌的形态学检查——涂片镜检

细菌的分离培养

生化检测

血清学试验

动物试验

分子生物学技术;一、细菌性病料的采集、保存与送检;防止污染;动物剖检;个体防护和消毒;动物尸体的处理;废弃物的处理;无菌采样;适时采样;适当部位;实质脏器的采集;液体病料的采集;其他病料的采集;细菌性病料的保存和送检;方法

光学显微镜检查

电子显微镜检查

意义

观察病料中有无细菌以及细菌的形态、数量、分布、结构、种类等，进行初步判断。;普通光学显微镜用油镜放大1000倍，一般细菌均能清楚看到。

荧光显微镜可看到发射荧光的细菌。还应用于免疫荧光技术中。

电子显微镜有透射电子显微镜和扫描电子显微镜。前者适于观察细菌内部超微结构，后者适于对细菌表面结构的观察。

;不染色细菌标本检查;常用染料：碱性、酸性、复合染料

碱性染料电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。由于细菌均带负电荷，易与染料结合而着色。常用的有碱性复红、结晶紫、美蓝等。

酸性染料电离后显色离子带负电荷，易与带正电荷的被染物结合。细菌都带有负电荷故不易着色。通常用来染细胞浆，而很少用于细菌的染色。常用的酸性染料有伊红、刚果红等。

复合染料(中性染料)及荧光染料复合染料是碱性染料和酸性染料的复合物，如瑞氏染料(伊红美蓝)、姬姆萨染料(伊红天青)等；荧光染料如荧光标记的抗体，荧光素常用异硫氢基荧光素。这些染色常用于某些特殊的染色技术中。

;1.革兰染色

2.抗酸染色

3.荧光染色;1.革兰染色

最经典、最常用的染色方法。

在分离培养前都要进行革兰染色、镜检。

分为G+菌和G-菌，可初步识别和鉴定。结果为临床早期诊断及治疗提供依据。

可为临床选择用药提供参考，有针对性的治疗方案。

;2.抗酸染色

将细菌分为抗酸性和非抗酸性细菌两大类。

只用于结核病等检查。

抗酸染色的鉴定结果，对疾病的诊断和治疗具有重要参考价值。;3.荧光染色

敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。主???用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及志贺菌等的检测。

还有：

鞭毛染色可观察有无鞭毛、鞭毛的位置及数量，在细菌鉴定中很重要。

异染颗粒染色镜检异染颗粒，为临床早期诊断白喉提供依据。;绝大多数细菌在适宜的条件下可以生长，细菌感染性患畜标本只有经过细菌的分离培养、鉴定和药物敏感试验，才可对感染性疾病进行病原学诊断并指导临床用药。

因此，细菌培养对疾病的诊断、预防和治疗具有重要的作用。;细菌室条件

细菌室必须安装严密的门窗，以防室内环境受到外界的污染。且室内禁用风扇，避免细菌的播散。

细菌室必须安装供空气消毒的紫外线灯，置于操作台上面1m处，每天开始工作前照射20min。对其消毒效果要定期检查，及时更换失效的灯管。

室内应备有消毒剂，用于试验中发生菌液洒溅时的及时消毒处理。同时还应备有供工作人员浸手用的盛有消毒剂的水盆、肥皂及自来水源等。

室内操作台须每日用消毒剂擦洗，地面至少一周用消毒剂擦洗1次。

对接收的标本、无菌器具、用过的物品等应明显分开井放在指定位置。同时要对用过的物品及时进行灭菌处理。

细菌室应有当地的气温特点的消防设备。

无菌操作台

;培养基的组成成分;方法：用分区划线法在合适培养基上培养。

意义

看培养基中有无细菌生长推断是否为细菌病；

依据菌落的特征判断细菌种类；

用菌落中的细菌进一步作形态学鉴定；

可进一步作生化鉴定、血清学鉴定及动物试验；

可进一步作药敏试验；

;通常选用适合目标菌生长的平板培养基对细菌进行分离培养。

不同细菌的菌落大小、形态、色泽、表面特征、边缘状态、隆起度、透明度等特征不同。有的细菌在鲜血琼脂平板上形成溶血环。

也可采用选择培养基或鉴别培养基，以起到抑制杂菌或快速鉴别的效果。

比如肠道杆菌科可选择麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂。;分区划线培养;麦康凯培养基

大肠杆菌菌落;不同的培养方法;进行生化试验的细菌必须是纯培养物。

检验时，根据可疑细菌的生化特性选择特定的一组生化试验，将结果与标准进行对比，以确定病原菌的种类。

例：不同种沙门氏菌的生化鉴定;鸡白痢沙门氏菌;;临床诊断中，可用于细菌的血清分型、快速诊断或大群检疫。

用已知抗体检测动物体内的病原菌。

用已知的病原菌抗原检测动物血清中的抗体。例：鸡白痢的检疫;;意义：将待检细菌液接种到动物体内，观察动物发病情况，进一步确认可疑细菌的致病作用和类型。

接种对象

本动物

试验动物

接种途径;灌服;分子生物学技术对病原菌的快速诊断和不能人工培养的细菌的探索发挥巨大的作用。

PCR技术、核酸分子杂交技术等。