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原核微生物抹片的制备

主讲人：郜飞燕

细菌标本的制备及染色

一目的要求

利用细菌培养物进行细菌标本片的制备；掌握革兰氏染色法。

二仪器材料

酒精灯接种环载玻片吸水纸生理盐水美蓝染色液革兰氏染色液

瑞氏染色液染色缸染色架洗瓶显微镜香柏油擦镜纸

细菌培养物细菌病料无菌摄子和剪刀特种铅笔

图示

细菌标本片的制作

(1)涂片：涂片不能太厚，严格按操作要求进行

取清洁载玻片一块，用吸管吸取生理盐水1滴置于玻片中央，再将接种环在火焰上灭菌，待冷后从固体培养基

上挑取少许菌落，置于玻片上的生理盐水中混均匀，并在玻片上涂成直径约为1cm的涂面，要求薄而均匀。

将液体培养物振摇均匀，用灭菌接种环钩取细菌液体培养物1~2环，涂抹于载玻片上即可。

如检材料为浓汁、血液、乳汁等可直接涂抹于玻片上。如为其他脏器，用灭菌剪刀剪取一小块，以其断面在

玻片上压印或涂抹成适当大小的薄片。

细菌标本片的制作

2.干燥

将抹片置于空气中自然干燥。

细菌标本片的制作

3.固定

涂片中的细菌凝固在玻片上，不致在以后的染色过程中被冲掉，便于染色；能杀死抹片中绝大多

数细菌。

将已干燥的抹片菌膜向上，在火焰上缓缓来回通过数次

（用手背触及抹片反面，以不烫手为宜）。

(2)化学固定：

滴加数滴甲醇于玻片上，固定3~5min,自然挥发干燥。

常用的细菌染色方法

1.美蓝染色法

2.革兰氏染色法

3.瑞氏染色法

革兰氏染色法

在固定好的涂片上滴加草酸铵结晶紫染色液，作用1~2min，水洗。

加革兰氏碘液，作用1~2min，水洗。

加95%酒精脱色约30s至1min，水洗。

加石炭酸复红，复染1min，水洗。

吸干后镜检。

革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

革兰阳性菌与阴性菌细胞壁结构比较

细胞壁革兰阳性菌革兰阴性菌

致密的三维立体结构疏松的二维平面结构

结构

（较坚韧）（较疏松）

厚度15-80nm10-15nm

肽聚糖层数可多达50层1-2层

占细胞壁干重40%-占细胞壁干重10%-

肽聚糖含量

95%20%

磷壁酸+—

脂蛋白—+

脂多糖—