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免疫學檢測技術的應用1.疾病的診斷感染性疾病、自身免疫病、腫瘤、免疫缺陷病、超敏反應性疾病等。2.疾病治療效果評價疾病預後、轉歸等監測3.免疫功能檢測細胞免疫功能，體液免疫功能，非特異性免疫功能測定等。第一節抗原或抗體的體外檢測根據抗原與抗體特異性結合反應的特性，用肉眼觀察或借助儀器檢測抗原抗體反應的結果，由此對樣品中的抗原或抗體進行定性、定量或定位分析。+?一、抗原抗體反應的特點1.高度特異性抗體可變區與相應抗原表位的空間構型互補，高度特異性地結合。2.反應可逆性抗原抗體以非共價鍵結合，易受溫度、pH和離子強度的影響而解離。抗原抗體反應的特點3.抗原抗體的比例合適抗原略多於抗體的比例，可形成肉眼可見的複合物。4.反應分兩個階段非共價結合階段——反應迅速IC形成大複合物——反應較慢二、影響抗原抗體反應的因素1.抗原抗體的濃度比例比例適當才能形成可見的反應複合物2.電解質常用0.85%NaCL溶液3.溫度最適溫度37度4.酸鹼度最適PH6～8三、抗原抗體反應類型（一）凝集反應概念：顆粒性抗原(細菌、紅細胞等)與相應抗體結合，在一定條件下出現肉眼可見的凝集物，稱為凝集反應。1.直接凝集反應抗原與抗體直接混合作用，出現凝集為陽性結果。①玻片直接凝集法：定性試驗②試管直接凝集法：半定量試驗試管法半定量試驗+?玻片直接凝集試驗1/21/41/81/161/321/641/1281/2561/5122.間接凝集法先將可溶性抗原或抗體吸附在顆粒載體上(如RBC,乳膠顆粒)，再與相應抗體或抗原反應，出現凝集為陽性結果。臨床常用的有間接血凝試驗、乳膠凝集試驗等。+→待檢樣品抗原吸附血球或乳膠顆粒反應凝集物3.間接凝集抑制試驗先將待檢抗原與已知的抗體反應，再加入用已知抗原吸附的載體顆粒，不出現凝集為陽性結果。例：乳膠凝集抑制試驗檢測HCG(妊娠診斷)?步驟1：將已知抗HCG抗體與待檢標本混勻＋?＋步驟2：加入HCG吸附的乳膠顆粒混勻?HCG吸附乳膠顆粒結果判斷：不凝集為陽性結果已知抗體待檢標本凝集反應（二）沉澱反應概念：可溶性抗原與相應抗體結合，在一定條件下形成免疫複合物沉澱，稱為沉澱反應。1.速率散射比濁法根據溶液中顆粒性物質對可見光的吸收強弱(朗伯-比爾定律)來測定IC的濃度，可通過儀器進行自動化檢測。2.瓊脂擴散法在瓊脂凝膠中進行的沉澱反應，稱為瓊脂擴散試驗。(1)單向瓊脂擴散試驗方法：將一定量的已知抗體加入融化的瓊脂中製成凝膠板，打孔，在孔內加抗原，放濕盒內於37℃擴散24h。結果：孔周圍出現沉澱環。定量檢測，環直徑與抗原含量呈正比。常用於Ig、C等含量測定。單向瓊脂擴散試驗AgAgAgAg含抗體凝膠抗原濃度沉澱環直徑沉澱環(2)雙向瓊脂擴散試驗方法：瓊脂板中打孔，抗原與抗體分別加入孔中，放濕盒內於37℃擴散24h。結果：兩孔間之間出現沉澱線為陽性常用於定性檢測抗原或抗體中的相關成分雙向瓊脂擴散試驗(3)對流免疫電泳方法：將雙向瓊脂擴散反應放在電場中進行，使抗原抗體在電場力的作用下相對泳動，使反應速度加快，檢測時間縮短。結果：同雙向瓊脂擴散AgAb-+對流免疫電泳（三）免疫標記技術免疫標記技術是利用螢光素、酶、放射性同位素等物質標記抗原或抗體，通過檢測標記物質的發光、顏色反應或射線強度，間接測定待檢標本中的抗體或抗原的免疫學方法。免疫標記技術是目前應用最廣泛的免疫學檢測技術，常用的方法有：免疫酶測定技術免疫螢光技術放射免疫測定技術免疫膠體金技術1、酶免疫測定技術概念：用酶標記已知抗原或抗體，檢測標本中的相應抗體或抗原，將抗原抗體反應的高度特異性與酶催化底物的顯色反應相結合的免疫學檢測技術。常用的標記酶辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶。常用的方法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)雙抗體夾心法——測定抗原間接法——測定抗體酶聯免疫吸附試驗(ELISA)將已知抗原或抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯板)上進行酶免疫反應，檢測相應的抗體或抗原。(1)雙抗體夾心法(測抗原)先將已知抗體吸附在固相載體上，加入待檢抗原，再加入酶標記的已知抗體，反應後形成“抗體-抗原-酶標抗體”複合物，最後加入酶的底物顯色。固相載體Ag已知抗體病人血清酶標記的抗體酶聯免疫吸附試驗(ELISA)(2)間接法(測抗體)先將已知抗原吸附在固相載體上，加入待檢血清，再加入酶標記的抗抗體，反應後形成“抗原-抗體-酶標抗抗體”複合物，最後加