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溃结灵调控UC大鼠Th17细胞分化机制的实验研究

一、引言

1.1研究背景与意义

溃疡性结肠炎（UlcerativeColitis，UC）作为一种慢性非特异性肠道炎症性疾病，近年来发病率呈上升趋势，严重影响患者的生活质量。其发病机制复杂，涉及遗传、免疫、环境和微生物等多个因素。目前的治疗方法虽能在一定程度上缓解症状，但存在诸多局限性，如药物副作用、病情易复发等。因此，深入探究UC的发病机制并寻找更为有效的治疗方法迫在眉睫。

Th17细胞作为免疫系统中的关键角色，在UC的发病机制中起着至关重要的作用。Th17细胞能够分泌如IL-17、IL-21和IL-22等多种炎症因子，这些炎症因子可招募中性粒细胞和单核细胞等免疫细胞至炎症部位，引发过度的炎症反应，进而对肠道黏膜造成损伤。研究表明，UC患者体内Th17细胞的数量和活性显著增加，且与疾病的严重程度密切相关。

溃结灵作为一种中药复方，在临床实践中对UC的治疗展现出一定的疗效。其主要成分包括救必应、白术、白芍、水蛭和炙甘草等，具有清热解毒、健脾止泻、活血化瘀等功效。前期研究已证实，溃结灵可改善UC大鼠的症状，调节肠道免疫应答。然而，其对UC大鼠Th17细胞分化的调节机制尚未完全明确。

本研究旨在深入探讨溃结灵对UC大鼠Th17细胞分化的调节机制，为揭示溃结灵治疗UC的作用机制提供理论依据，同时为UC的临床治疗提供新的思路和方法，具有重要的理论和实际意义。

1.2国内外研究现状

在国外，对于UC的治疗主要依赖于氨基水杨酸制剂、糖皮质激素、免疫抑制剂及生物制剂等。这些药物虽能在一定程度上缓解症状，但存在药物副作用、耐药性及病情易复发等问题。近年来，随着对UC发病机制研究的深入，免疫调节治疗成为研究热点，Th17细胞作为重要的免疫调节细胞，其在UC发病中的作用受到广泛关注。相关研究表明，通过调节Th17细胞的分化和功能，可有效改善UC的病情。

在国内，中医药治疗UC具有独特优势，溃结灵作为一种中药复方，在临床应用中取得了一定的疗效。已有研究表明，溃结灵可减轻UC大鼠的炎症反应，改善结肠黏膜病变，调节肠道免疫功能。然而，其作用机制尚未完全明确。部分研究从调节炎症因子、改善肠道菌群等角度进行探讨，但对于溃结灵对Th17细胞分化的调节机制研究较少。

在Th17细胞分化机制方面，国内外研究表明，TGF-β、IL-6、IL-21等细胞因子及STAT3、RORγt等转录因子在Th17细胞的分化过程中发挥着关键作用。TGF-β和IL-6共同作用可诱导初始T细胞向Th17细胞分化，IL-21则可通过自分泌方式进一步促进Th17细胞的分化和增殖。STAT3被激活后可上调RORγt的表达，RORγt作为Th17细胞的特异性转录因子，可调控Th17细胞相关细胞因子的表达。

1.3研究目标与内容

本研究旨在揭示溃结灵对UC大鼠Th17细胞分化的调节机制，为溃结灵治疗UC提供理论依据。具体研究内容如下：

建立UC大鼠模型，观察溃结灵对UC大鼠结肠黏膜炎症的影响，包括结肠黏膜的病理形态学变化、炎症因子的表达水平等。

检测UC大鼠结肠黏膜中TGF-β1、IL-6、IL-21、STAT3、RORγt、IL-17等与Th17细胞分化相关的细胞因子和转录因子的mRNA表达水平，探讨溃结灵对其表达的影响。

检测UC大鼠结肠黏膜中RORγt、STAT3、IL-21等蛋白的表达水平，进一步验证溃结灵对Th17细胞分化相关蛋白表达的调节作用。

1.4研究方法与技术路线

本研究采用实验研究法，具体步骤如下：

动物分组与模型建立：将健康SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、溃结灵低剂量组、溃结灵中剂量组、溃结灵高剂量组和阳性对照组。除正常对照组外，其余各组采用葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导建立UC大鼠模型。

给药干预：造模成功后，溃结灵低、中、高剂量组分别给予相应剂量的溃结灵灌胃，阳性对照组给予柳氮磺胺吡啶灌胃，正常对照组和模型组给予等体积的生理盐水灌胃，连续给药14天。

指标检测：实验结束后，处死大鼠，取结肠组织进行病理形态学观察；采用实时荧光定量PCR法检测结肠黏膜中TGF-β1、IL-6、IL-21、STAT3、RORγt、IL-17等mRNA的表达水平；采用免疫印迹法（Westernblot）检测结肠黏膜中RORγt、STAT3、IL-21等蛋白的表达水平。

数据分析：采用SPSS22.0软件对数据进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用