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2025-11-06 发布于北京
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文库构建实验操作流程及纯化方法.pdf

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1.EndRepair

1.1Reaction

5xEndRepairBuffer20uL

EndRepairEnzymeMix6uL

1-5ug

H2Ox

Total100uL

•20°Cfor30min,withoutheatinglid.

1.2Cleanup

Endrepairreaction100uL

MCLABlibrarypurifyBeads160uL

Total260uL

•Incubateonrotorfor15min,washtwicewith80%ethanol.

2.A-tailing(*MakeA-tailingreactionmixbeforebeadsdried)

5xA-tailingBuffer10uL

A-tailingEnzyme1uL

H2O39uL

Total50uL

•Add50uLmixtotubecontainingbeads.Mixwithpipettefor10times.

•Incubateat37°Cfor30min.

•NocleanupafterA-tailing

3.Liion

3.1Reaction

LiionBuffer4uL

Liionenzyme1uL

Adaptor(30uM)5uL

Total10uL

•Add10uLliionmastermixtoA-tailingreaction.Incubateat20°Cfor30min.

3.2Cleanup

LiionReaction60uL

MCLABBeadsBindingBuffer60uL

Total120uL

•Incubateonrotorfor15min,washtwicewith80%ethanol.Elutein25uL0.1xTEbuffer.

•Retain1ulforBioanalyzer,setupPCRwiththeremainingfollowedby1xbeads

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