DB43∕T 956-2014 南方水稻黑条矮缩病毒检测方法RT-PCR法.docxVIP

ICS65.020.20

B05

DB43

湖南省地方标准

DB43/T956—2014

南方水稻黑条矮缩病毒检测方法RT-PCR法

Detectionmethodofsouthernriceblack-streakeddwarfvirus(RT-PCR)

2014-10-21发布2014-11-20实施

湖南省质量技术监督局发布

I

DB43/T956—2014

目次

前言 Ⅱ

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4缩略语 1

5检测方法 2

5.1试剂 2

5.2仪器设备 2

5.3操作程序 2

6检测后样品的处理 4

附录A(规范性附录)相关试剂配制 5

附录B(资料性附录)南方水稻黑条矮缩病毒侵染水稻典型症状 6

附录C(规范性附录)RT-PCR电泳图 7

Ⅱ

DB43/T956—2014

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由湖南省植物保护研究所提出。

本标准由湖南省农业标准化委员会归口。

本标准由湖南省植物保护研究所起草。

本标准主要起草人：张松柏、刘勇、张德咏、罗香文、彭静。

DB43/T956—2014

1

南方水稻黑条矮缩病毒检测方法RT-PCR

1范围

本规程规定了南方水稻黑条矮缩病毒检测方法RT-PCR法的术语和定义、RT-PCR检测方法、结果判定、检测后样品处理等技术要求。

本规程适用于侵染水稻的南方水稻黑条矮缩病毒的室内检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB6682-2008分析实验室用水规格和试验方法。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

南方水稻黑条矮缩病毒SouthernRiceBlack-StreakedDwarfVirus,SRBSDV

由白背飞虱传播的一种水稻病毒，主要危害水稻、玉米等禾本科作物，其危害水稻的典型症状见附录B。

3.2

反转录-聚合酶链式反应ReverseTranscriptasePolymeraseChainReaction,RT-PCR

是结合RNA反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)的检测技术。先以总RNA为模板，利用反转录酶的作用合成cDNA,然后以cDNA为模板，利用特异性引物扩增得到目的片段。

4缩略语

下列缩略语适用于本标准。

bp:碱基对

DNA:脱氧核糖核酸

dNTPs:脱氧核糖核苷三磷酸

PCR:聚合酶链式反应

RNA:核糖核酸

RT-PCR:反转录PCR

Taq酶：TaqDNA聚合酶

DEPC:焦碳酸二乙酯

2

DB43/T956—2014

5检测方法

除另有规定外，所有实验用试剂均为分析纯；实验用水均为超纯水，规格符合GB6682-2008的相关规定。

5.1试剂

5.1.1变性液：见附录A.1。

5.1.2AMV反转录酶(200U/μL)。

5.1.3RNA酶抑制剂(50U/μL)。

5.1.4TaqDNA聚合酶(5U/μL)。

5.1.51.5%琼脂糖凝胶：见附录A.2。

5.1.650×TAE缓冲液：见附录A.3。

5.1.7SYBRGreenI染色液(100×)

5.1.8上样缓冲液：见附录A.4。

5.1.9DEPC处理的灭菌双蒸水：见附录A.5。

5.1.10异丙醇。

5.1.11DEPC处理的灭菌双蒸水配置的75%乙醇：见附录A.6。

5.1.125×AMV缓冲液

5.1.132.5mmoldNTPs

5.1.1410×PCR缓冲液

5.1.15DNA分子量标准。

5.1.16引物：见附录A.7。

5.1.17氯仿。

5.2仪器设备

5.2.1高速冷冻离心机：最高转速应大于12000rpm。

5.2.2PCR扩增仪。

5.2.3核酸电泳仪和水平电泳槽。

5.