第一节 基因工程的步骤.pptVIP

第一节基因工程的步骤第1页，共16页，星期日，2025年，2月5日第二节基因工程的步骤第2页，共16页，星期日，2025年，2月5日1、基因工程的基本工具（1）“分子手术刀”---。①来源：主要是从生物中分离纯化出来的②功能：能够识别双链DNA分子的某种的序列，并且切割特定的两个脱氧核苷酸之间的断裂，形成黏性末端。2、“分子缝合针”-----。①功能：缝合两个脱氧核苷酸之间的。②与DNA聚合酶作用的异同：。3、“分子运输车”----。最常用的载体是：。必须具备的条件：4、目的基因的获取方法：。5、将目的基因导入植物细胞，最常用的方法是，其次还有和。受体细胞可以是受精卵、体细胞（经组织培养成为完整个体）。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是。此方法的受体细胞多是。复习回顾第3页，共16页，星期日，2025年，2月5日如图为DNA分子的切割和连接过程：（1）EcoRl是一种???酶，其识别序列是??????????，切割点是????与?????之间的???????????键。切割结果产生的DNA片段末端形式为???????????。（2）不同来源DNA片段结合，在这里需要的酶应是????????????????????连接酶，此酶是通过在??????????与??????????之间形成???????????键，而起“缝合”作用的。限制酶GAATTC鸟嘌呤脱氧核苷酸腺嘌吟脱氧核苷酸磷酸二酯键黏性末端DNA鸟嘌呤脱氧核苷酸腺嘌吟脱氧核苷酸磷酸二酯键第4页，共16页，星期日，2025年，2月5日通过DNA重组技术使原有基因得以改造的动物称为转基因动物。运用这一技术使羊奶中含有人体蛋白质，下图表示了这一技术的基本过程，在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是一G↓GATCC一，请回答：（1）从羊染色体中“剪下羊蛋白质基因的酶是。人体蛋白质基因“插入”后连接在羊体细胞染色体中时需要的酶是。（2）请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图。（3）人体蛋白质基因之所以能“插入”到羊的染色体内，原因是，“插入”时常用的工具是。限制性内切酶DNA连接酶用限制酶切割—CCTAG﹐G——GGATCC——CCTAGG—有互补的碱基序列细菌质粒或病毒第5页，共16页，星期日，2025年，2月5日32P标记的DNA分子探针杂交放射自显影法DNA杂交直接鉴定第6页，共16页，星期日，2025年，2月5日基因工程的一般程序一、目的基因的获得二、重组载体的构建三、重组载体的导入和筛选四、目的基因的表达与鉴定第7页，共16页，星期日，2025年，2月5日一、目的基因的获得直接分离法（最常用的方法——鸟枪法）人工合成法化学合成法反转录法法外源DNADNA片段目的基因多个目的基因信使RNADNA单链双链DNA多个目的基因多个目的基因蛋白质氨基酸序列目的基因核苷酸序列目的基因第8页，共16页，星期日，2025年，2月5日二、重组载体的构建基因表达载体的组成：b、目的基因a、启动子c、终止子d、标记基因e、复制原点提醒①与载体相比较,增加启动子、目的基因和终止子三个基因片段,其功能各不相同。②启动子(DNA片段)≠起始密码子(RNA);终止子(DNA片段)≠终止密码子(RNA)。第9页，共16页，星期日，2025年，2月5日三、重组载体的导入和筛选细胞类型常用方法受体细胞转化过程植物细胞农杆菌转化法体细胞将目的基因插入Ti质粒的T-DNA上→转入农杆菌→