第四章液相色谱流动相和固定相.pptxVIP

第四章液相色谱流动相和固定相本章将深入探讨液相色谱技术中两个关键组成部分-流动相和固定相的特性及其在色谱分离中的作用。我们将详细介绍流动相的选择原则、固定相的种类及其选择,以及它们如何协同工作实现有效的色谱分离。AL作者：艾说捝

液相色谱的流动相液相色谱中的流动相是指在色谱柱中流动的液体。流动相的选择和性能对分离效果有重要影响。本节将讨论流动相的作用、选择原则以及常见的流动相类型。

流动相的作用保持分离流动相在色谱分离过程中扮演着关键角色,通过与固定相的相互作用,能够有效地推动待分离物质在色谱柱中移动,从而实现样品成分的分离。传递样品流动相通过柱子以一定的流速流动,能够将待分析的样品分子从进样端带到检测端,确保样品能够有序地进入检测系统。调节极性不同性质的流动相,如水、有机溶剂等,可以调节整个色谱系统的极性,从而影响样品分子在固定相上的保留行为,实现目标成分的分离。

流动相的选择原则适用性流动相的选择应根据待分析样品的性质和色谱分离的目标来确定，确保流动相与样品物质之间的相互作用达到最佳效果。分离性能流动相的组成和性质直接影响色谱分离效果，需要综合考虑分析物的极性、离子性、溶解性等因素。检测兼容性流动相的选择还需要考虑到与检测器的相容性，避免对检测产生干扰或者抑制。

水作为流动相水是液相色谱最常见和最基本的流动相。它无色无味、无毒无害,对实验环境和仪器造成的污染也最小。同时水的极性适中,可以与各种类型的固定相相兼容,对大多数化合物的分离效果也很理想。

有机溶剂作为流动相除了水以外,有机溶剂也是液相色谱的重要流动相选择。有机溶剂选择时要考虑极性、粘度、沸点等因素,常用的有甲醇、乙腈、异丙醇等。它们可单独使用或混合使用,能有效调控分离效果。

缓冲液作为流动相缓冲液的作用缓冲液可以维持流动相的pH值稳定,确保溶质分子的电荷状态不发生变化,从而获得稳定可重现的色谱分离效果。缓冲液的选择选择合适的缓冲液体系需要考虑溶质的性质、分离要求以及色谱柱的特性,以达到最佳的分离效果。缓冲液的浓度缓冲液浓度的选择需要平衡分离效果与柱压,通常在5-50mM之间。过高的浓度可能导致柱压升高。

离子对试剂作为流动相离子对试剂是一种特殊的添加剂,可以与离子性样品形成离子对,从而改善在反相色谱中的分离效果。离子对试剂通常为季铵盐或磺酸盐类化合物,能与带电荷的分子物种产生静电相互作用。合理选择离子对试剂可以提高分析的灵敏度和选择性。

固定相的作用在液相色谱中,固定相起着至关重要的作用。它决定了色谱分离的原理和特性,影响色谱分离的选择性、效率和分辨率。选择合适的固定相是液相色谱分析成功的关键。

固定相的作用分离功能固定相在液相色谱中起到分离目标物质的核心作用，通过与流动相的相互作用达成分离效果。浓缩作用固定相可以将样品中的目标物质从流动相中分离并富集，提高检测灵敏度。稳定性选择合适的固定相可以提高分离过程的稳定性和重复性，确保分析结果的可靠性。

常见的固定相类型正相色谱固定相这类固定相主要以极性基团如硅胶、氨基、氰基等为基础,可用于分离极性较高的化合物。较为常见的有正相C18、正相C8等。反相色谱固定相这类固定相以疏水性基团如烷基等为主,可用于分离极性较低的化合物。代表性的有反相C18、C8、C4等。离子交换色谱固定相该类型固定相含有离子交换基团,可用于分离带电荷的离子性化合物。阳离子交换树脂和阴离子交换树脂是常见代表。亲和色谱固定相这类固定相含有特异性配体,可与目标物质发生特异性相互作用,用于分离纯化生物大分子。典型如免疫亲和树脂。

正相色谱固定相正相色谱固定相是一种极性相对较强的填料,通常由二氧化硅、氧化铝、氮化硅等材料制成。它们具有强极性,能与带有极性基团的化合物发生强的相互作用,从而实现对极性化合物的有效分离。正相色谱适用于极性化合物的分离分析,比如醇类、酚类、氨基酸等。

反相色谱固定相反相色谱固定相是最广泛使用的液相色谱固定相之一。它由长链烷基如C18烷基键合到硅胶基质上而成，表面极性较低，可以高效分离极性较低的化合物。不同长度的烷基链可以提供不同的分离效果，C18柱是最常见的反相柱。

离子交换色谱固定相离子交换树脂离子交换色谱固定相由具有离子交换基团的高度交联聚合物构成,其通过静电相互作用实现对离子物质的分离。离子交换柱离子交换柱填充有离子交换树脂,可根据目标物质的离子特性进行选择性分离。离子交换色谱应用离子交换色谱广泛应用于生物化学、环境分析等领域,可实现蛋白质、氨基酸等离子物质的高效分离纯化。

亲和色谱固定相亲和色谱是一种利用生物分子间的特异性相互作用来分离目标物质的色谱技术。其固定相上含有可与目标分子结合的配体,通过这种亲和性识别与捕获特定的分子。这种高度选择性的分离方法可以有效分离出复杂体系中的目标成分。

色谱柱的选择1尺寸与性能根据