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胰酶辅助高效液相色谱分析方法优化
目录
文档简述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3
1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
1.1.1胰酶及其应用场景概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
1.1.2高效液相色谱技术发展现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8
1.1.3胰酶辅助HPLC分析优势探讨．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
1.2国内外研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11
1.2.1胰酶在色谱分析中的应用研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
1.2.2高效液相色谱分析方法优化策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
1.2.3胰酶与其他酶联用技术展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
1.3本文研究目的与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20
1.3.1研究目标设定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24
1.3.2主要研究内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
1.3.3技术路线概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
实验部分．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
2.1实验仪器与材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
2.1.1主要仪器设备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34
2.1.2实验试剂与对照品．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36
2.1.3实验动物与样品来源．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37
2.2实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38
2.2.1色谱条件建立．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40
2.2.2胰酶处理方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42
2.2.3分析方法学考察．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44
结果与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46
3.1色谱条件优化结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47
3.1.1不同色谱柱的比较研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48
3.1.2流动相配方对分离效果的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52
3.1.3柱温与流速参数优化分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53
3.2胰酶处理效果评价．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．54
3.2.1胰酶对样品消解效果的分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．58
3.2.2不同酶用量对分析的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．63
3.2.3胰酶处理最佳条件的确定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．68
3.3方法学验证结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．70
3.3.1线性关系与相关系数分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．72
3.3.2检测限与定量限的确定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．73
3.3.3加标回收率与精密度实验．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．75
3.3.4方法稳定性评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．78
3.4高效液相色谱分析方法优化策略探讨．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．79
3.4.1胰酶辅助与其他方法的对比．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．82
3.4.2方
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