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SupplementaryMaterials
SimplifyingandstreamliningE.coli-basedcell-freeproteinsynthesis
PreparationofaPANOx-SPpremixsolutionforcell-freeproteinsynthesis
1.Introduction
Thissectiondetailstheproceduresforthepreparationofindividualcell-freeprotein
synthesis(CFPS)precursorsolutionsandcombinationofthesesolutionsinto500-mLofa
convenient4xpremix(FigureS1).500-mLofthe4xpremixissufficienttoperform2Lof
CFPS.Ifvolumessmallerorlargervolumesthan500-mLaredesired,theamountofreagents
andchemicalsmustbescaleddownorupaccordingly.Theprecursorsolutionshavetypically
beenpreparedusingthefollowingprotocolsinthefollowingorder:
1)PreparationofaMagnesiumGlutamateSolution
2)Preparationofa10xSaltSolution
3)Preparationofa25xNucleotideMix
4)Preparationofa25x19aminoacidmix
5)Preparationofa25xPEPsolution
6)TestingofindividualCFPSprecursorsolutions(Testbatchof4xPremix)
7)CombinationofindividualCFPSprecursorsolutionsintoaFinal4xPremixsolution
EquipmentNote:UsingaheatedstirtewithtemperaturecontrolalongwithapHprobeand
pHmeterwillbehelpfulinpreparingtheCFPSprecursorsolutionsandPremix.
补充材料
简化和简化基于大肠杆菌的无细白质合成
用于无细白质合成的PANOx‑SP预混溶液的
1。简介
本节详细介绍了单独的无细白质合成(CFPS)前体溶液的程序以及将这些
溶液组合成500mL方便的4x预混合物的程序（图S1）。500mL的4x预混物足以
执行2LCFPS。如果需要小于或大于500mL的体积，则必须相应减少或增加试剂和化
学品的量。通常使用以下方案按以下顺序前体溶液：
1)谷氨酸镁溶液的2)10x盐溶液的3)25x核苷酸混合物的4)
25x19氨基酸混合物的5)25x
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