药品检验用菌种的传代和保藏2讲课文档.pptVIP

液体直接干燥保藏法需要加入保护剂干燥之前不需冻结在干燥过程中为增大蒸发面积，可加入多孔材料干燥后的容器应熔封*第28页，共50页。蒸馏水保藏法最为简便的微生物保藏法微生物细胞或孢子保藏在蒸馏水中保藏的容器应密封适于保藏棒状杆菌、土壤杆菌和假单孢菌等*第29页，共50页。液氮冰箱超低温保藏法需专用设备－液氮超低温冰箱菌悬液密封于安瓿管内，控速冻结国外已普遍采用保藏时间长*第30页，共50页。冻结真空干燥保藏法历史悠久，又称冻干法不产生孢子只产生菌丝体的丝状真菌不宜采用该法适用面广保藏时间可达10年以上多为菌种保藏机构采用*第31页，共50页。冻结真空干燥保藏法密封性好，可避免保藏期间的污染保藏容器体积小，方便携带和贮藏保藏时间更长，变异概率更低*第32页，共50页。普通微生物实验室适用的保藏技术琼脂斜面低温保藏法液体石蜡保藏法低温冷冻保藏法甘油冷冻保藏法*第33页，共50页。琼脂斜面低温保藏法细菌置4～6℃保藏，芽孢杆菌每3～6个月移植一次，其他细菌每月移植一次。放线菌于4～6℃保藏，每3个月移植一次。酵母菌于4～6℃保藏，每4～6个月移植一次。丝状真菌于4～6℃保藏，每4个月移植一次。担子菌于4～6℃保藏，每3个月移植一次。保藏的湿度通常在50％～70％为宜。*第34页，共50页。菌种保藏的一般规定1、菌种“代”的确定：2005版药典规定，以干燥菌种管为第“0”代，由此得到的第一批子代为第一代，以此类推。2、菌种传代次数规定：2005版药典规定不超过5代。3、菌种应专人保藏、专柜贮藏，认真做好登记，统一编号，按期传代，并做好有关检验记录。4、保存菌种传代或冻干均应填写专用记录，菌种管上应有标签，表明菌种编号、代次、批号、日期。5、过期菌种应及时处理、登记，经121℃30分钟灭菌消毒。*第35页，共50页。药品检验用菌种的传代和保藏第1页，共50页。（优选）药品检验用菌种的传代和保藏*第2页，共50页。标准菌种的概念及其管理标准菌种是指由国家授权机构制备的具有稳定的生物学特性并用妥善方法保藏的菌种。我国的标准菌种统一由中国菌种保藏管理委员会（CCCCM）管理，涉及药品微生物检验的菌种由医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC）提供*第3页，共50页。标准菌种的保藏形式我国提供的标准菌种通常是以冻干粉的形式包装于熔封的厚玻璃容器中。在这种容器中，微生物通常与赋形剂共存，由于缺乏生长必须的环境条件，一般呈休眠状态。*第4页，共50页。纯培养所谓微生物的纯培养是指在一个微生物的菌落形成单位中，所有的微生物细胞或孢子都属于生物学的同一个种。严格地说，纯培养是在培养基上由一个细胞或孢子分裂、繁殖而产生的后代。在该细胞或孢子的生长过程种，不受其他微生物的侵犯，不会在培养物中产生另外微生物种的后代，在整个生长过程中不发生变异或死亡。*第5页，共50页。获取纯培养的工作环境1、洁净工作室：环境洁净度10000级下的局部100级的单向流空气区域内，全过程必须无菌操作，防止微生物污染。2、无菌隔离舱*第6页，共50页。获取纯培养的接种工具1、接种环2、接种针3、接种铲4、接种钩5、其他玻璃器械*第7页，共50页。获取纯培养的其他器具1、玻璃器皿：如各种规格培养皿。2、微生物实验室常用的设备，如高压灭菌锅、恒温培养箱等*第8页，共50页。获取纯培养的主要技术－移植（又称接种）微生物的移植（或称接种）是指将微生物接种在培养基上的操作。*第9页，共50页。移植（又称接种）的两种方式－划线和穿刺1、划线法是指用接种工具将微生物细胞移植在固体培养基斜面或平板上的一种方法。2、穿刺法是指用接种工具将微生物细胞移植到固体或半固体培养基内的一种方法。*第10页，共50页。影响集菌培养效果的若干因素温度渗透压氧气光pH值和氧化还原电位培养基抗生素*第11页，共50页。验证纯培养的主要依据1、用显微镜观察时，全部的生物个体是相似的，如果是细菌，对革兰氏染色反应应当是一致的。2、将培养物制成悬液，重新倾注平板，或平板划线培养后，所形成的全部菌落的形态应该是相似的。如果是细菌，将重新形成的菌落各作穿刺培养，其培养特征应当是一致的。3、从重新分离的各菌落作生理特征观测时，如对氮源的利用，对糖类的发酵或同化以及其他生理生化的测定，应呈现出一致性。*第12页，共50页。定期移植保藏法一般步骤为：将菌种接种在所要求的培养基上，置最适温度下集菌培养。得到健壮的菌体（