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演讲人：
日期:
病理科病理学常用标本制作要点
CATALOGUE
目录
01
标本采集要求
02
固定处理规范
03
脱水与包埋流程
04
切片制作技术
05
染色操作要点
06
标本保存与维护
01
标本采集要求
采集工具选择标准
无菌性与材质要求
采集工具需选用医用级不锈钢或一次性无菌器械，避免样本污染或化学反应干扰检测结果，如活检钳、穿刺针等需符合国际医疗器械标准。
防交叉污染设计
工具应具备可拆卸或一次性使用特性，如带密封盖的标本容器、独立包装的刀片，避免样本间残留物污染。
尺寸适配性
根据组织类型选择合适尺寸的工具，如微小病灶需使用细针穿刺，大块组织切除需配备宽口活检钳，确保样本完整性。
样本标识与记录规范
唯一性编码系统
采用条形码或二维码标识样本，关联患者信息、采集部位及临床诊断，确保全程可追溯，避免混淆或丢失。
双人核对机制
需标注采集时的环境条件（如温度、湿度）及固定液类型，为后续病理分析提供参考依据。
采集后需由操作者与复核者共同确认标签信息（如姓名、病历号、标本类型），并签署电子或纸质记录存档。
环境参数记录
新鲜组织需在低温（2-8℃）环境下运输，固定标本需密封防漏，运输时间不超过规定时限以保障样本活性。
温度与时间管控
使用防震、防漏的三层容器（内层吸收材料、中层密封袋、外层硬质盒），符合UN3373生物安全运输标准。
生物安全包装
通过LIS系统（实验室信息系统）实时更新运输状态，接收时需扫描核对样本信息并记录交接人员及时间节点。
电子化交接流程
运输与交接控制
02
固定处理规范
固定液种类与浓度
最常用固定液，适用于大多数组织标本，能有效保存细胞形态和抗原性，浓度需严格控制在8%-10%以避免过度硬化或固定不足。
中性缓冲福尔马林（10%）
适用于特殊组织如胚胎或脂肪组织，混合比例通常为乙醇85%与甲醛15%，可减少组织收缩并增强渗透性。
含重铬酸钾、升汞和冰醋酸，适用于骨髓、淋巴结等造血组织，需现配现用以避免沉淀影响固定效果。
乙醇-甲醛混合液（AFA）
含苦味酸、甲醛和冰醋酸，特别适合结缔组织和肌肉标本，能清晰显示细胞核细节，但需注意其强酸性可能影响后续染色。
Bouin氏液
01
02
04
03
Zenker氏液
小块组织（厚度≤5mm）需固定6-12小时，大块或致密组织（如子宫肌瘤）需延长至24-48小时，确保充分渗透。
固定应在室温（20-25℃）下进行，高温可能加速组织自溶，低温（如4℃）会显著减缓固定液渗透速率，仅适用于特殊研究需求。
神经组织需缩短固定时间至4-6小时以避免过度硬化，而富含脂质的组织（如乳腺）可延长至36小时以确保充分固定。
通过定期切割组织边缘检查固定效果，若中心区域仍呈现未固定状态（如柔软或色泽不均），需延长固定时间。
固定时间与温度控制
常规组织固定时间
温度调控
特殊组织处理
动态监测
固定后冲洗要点
流水冲洗标准
中性福尔马林固定的组织需用流动自来水冲洗30分钟至2小时，彻底去除残留甲醛，防止后续染色出现背景着色或结晶沉淀。
01
缓冲液漂洗
对Zenker氏液或Bouin氏液固定的标本，需先以70%乙醇漂洗数次直至无色，再转入流水冲洗，避免酸性残留导致组织脆化。
特殊溶剂处理
含汞固定液（如Zenker氏液）固定的组织需用碘酒精（0.5%）脱汞处理30分钟，再以硫代硫酸钠溶液中和，防止汞结晶干扰切片。
冲洗后存储
冲洗完成的组织应暂存于70%乙醇中，避免干燥变形，长期保存需更换为新鲜乙醇并密封防挥发。
02
03
04
03
脱水与包埋流程
脱水试剂梯度设置
01
02
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梯度乙醇脱水法
采用从低浓度（如70%）到高浓度（如100%）的乙醇梯度进行组织脱水，确保水分逐步替换，避免组织收缩或变形。高浓度乙醇需严格控制时间，防止组织过度硬化。
异丙醇替代方案
对于易脆组织，可选用异丙醇替代乙醇，其渗透性更强且对脂类保存更优，但需配合中间试剂（如丙酮）以提升脱水效率。
自动化脱水机参数优化
现代脱水机需根据组织类型调整梯度时间，如致密组织（子宫肌瘤）需延长高浓度乙醇作用时间，而疏松组织（肺）需缩短以避免过度脱水。
二甲苯透明处理
柠檬烯或松油烯等生物基透明剂可减少毒性，但需延长透明时间并监测组织透明度，适用于科研机构或特殊病例。
环保替代品应用
透明终点判断
以组织呈均质半透明状、无乳白色云雾为达标标准，肝、肾等血供丰富器官需额外注意透明剂更换频率。
作为经典透明剂，需分两阶段使用（首次透明去除乙醇，二次彻底透明），每次时间控制在1-2小时，避免组织脆化。透明不足会导致石蜡渗透不良，过度则引发细胞核收缩。
透明剂使用技巧
石蜡熔点选择
常规病理采用56-58℃低熔点石蜡，利于切片；而特殊染色（如免疫组化）建议使用60-62℃高熔点石蜡以增强组织支撑性
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