马耳他布鲁氏菌膜间质蛋白BP26抗原表位的精准筛查与鉴定研究.docxVIP

马耳他布鲁氏菌膜间质蛋白BP26抗原表位的精准筛查与鉴定研究

一、引言

1.1研究背景

布鲁氏菌病（Brucellosis），简称布病，是由布鲁氏菌属（Brucella）细菌侵入机体后引起的一种人畜共患传染病。这种疾病在全球范围内广泛传播，严重威胁着人类健康和畜牧业的发展，每年都会给全球带来巨大的经济损失。据世界卫生组织统计，全球每年约有50万人感染布鲁氏菌病，而中国也是布病的“重灾区”之一，人间布病发病率超过1/10万，主要威胁宁夏、新疆、浙江、山西、甘肃、辽宁、上海、青海、河北、江苏等约28个省份。据中国疾病预防控制中心（CDC）报告，2005-2008年全国布病新发病人数分别为18416、19013、21901、30002例，2006年、2007年发病数上升到全国甲类、乙类传染病发病数顺位的第10位，2009年发病人数超过3.5万，达历史新高，2012年发病人数已接近4万，且以平均每年10%的速率上升。

布鲁氏菌属细菌种类繁多，目前已发现的有12个种，包括羊种（B.melitensis）、牛种（B.abortus）、猪种（B.suis）、犬种（B.canis）、绵羊附睾种（B.ovis）、沙林鼠种（B.neotomae）、鲸型（B.ceti）、鳍型（B.pinnipedialis）、田鼠种（B.microti）、歧见玛瑙宝螺种（B.inopinata）、狒狒种（B.papionis）、赤狐种（B.vulpis）。不同种布鲁氏菌的基因同源性可高达94%，但人畜共患病潜力有所不同。在我国流行的布鲁氏菌主要以羊种为主，占流行株的80%，牛种占10%，猪种不到1%。羊种布鲁氏菌，即马耳他布鲁氏菌，是绵羊和山羊的致病菌，也是对人毒力最强、危害最大的亚种。

人感染布鲁氏菌后，症状表现复杂多样，急性期可出现发热、多汗、乏力、关节炎、睾丸炎等症状，热型以弛张型最为多见，也可见不规则型、持续低热等；多汗是突出症状，常于深夜清晨热急骤下降时出现大汗淋漓，患者大多感乏力、软弱；关节疼痛主要集中在骶髂、髋、膝、肩、腕、肘等大关节，急性期可呈游走性，疼痛呈锥刺状，一般镇痛药无效；睾丸炎也是特征性症状之一，大多呈单侧性，可大如鹅卵，伴明显压痛。若急性期未得到及时有效的治疗，疾病易转为慢性，可引起肝脾、淋巴结肿大，关节炎等变态反应性疾病，还可能导致孕妇流产，甚至出现母婴垂直传播。动物感染布鲁氏菌后，公畜可引发睾丸炎和附睾炎，孕畜多数发生流产、早产、死胎等，这给畜牧业带来了重大损失，严重影响了养殖经济效益和动物健康。

布鲁氏菌为革兰氏阴性、兼性厌氧胞内寄生菌，无芽胞，无鞭毛，有荚膜。其特殊的生物学特性使得药物治疗往往难以取得预期效果。目前临床使用的疫苗大部分为减毒活疫苗，如我国自主研发用于绵羊和山羊接种的羊种布菌疫苗M5-90，虽然免疫效果相对较好，但也存在明显缺陷。一方面，免疫动物与自然感染动物难以区别，这严重影响了布病的诊断和检疫工作；另一方面，疫苗毒力较强，可引起部分孕畜流产。因此，研制一种新型的毒力低、免疫效果好、能进行鉴别诊断的分子标记疫苗迫在眉睫。

在布鲁氏菌的众多蛋白中，膜间质蛋白BP26（又称CP28或OMP28）备受关注。该蛋白的基因全长753bp，编码250个氨基酸，是一种具有强免疫原性的外膜蛋白，也是一种可由细胞内向细胞外释放的可溶性蛋白。BP26基因在不同种布鲁氏菌间的序列高度保守，研究表明，BP26蛋白在感染的牛、绵羊、山羊和人中是一种免疫优势抗原，可作为动物和人布菌感染的诊断抗原，准确率可达到86%以上。此外，还有研究报道BP26蛋白对小鼠具有一定保护作用，这为新型布鲁氏菌疫苗及诊断制剂的研究提供了重要的实验依据。因此，深入研究BP26蛋白的抗原表位，对于开发新型疫苗和诊断试剂具有重要的理论和实践意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过对马耳他布鲁氏菌膜间质蛋白BP26抗原表位进行系统的筛查与鉴定，明确其关键抗原表位，为新型布鲁氏菌疫苗的研发和高效诊断试剂的开发提供坚实的理论基础和关键技术支撑。

在疫苗研发方面，目前的布鲁氏菌疫苗存在诸多问题，如免疫动物与自然感染动物难以区分、毒力较强等。通过鉴定BP26蛋白的抗原表位，能够在保留其保护性抗原表位的前提下，针对抗原表位及毒力相关位点进行分子修饰或改造，构建分子标记的弱毒疫苗株。这种新型疫苗有望提高免疫保护效果，解决现有疫苗的缺陷，为布鲁氏菌病的防控提供更有效的手段，从而减少动物感染布鲁氏菌病导致的流产、不孕等问题，保障畜牧业的健康发展，降低因畜牧业损失带来的经济负担。

对于疾病诊断而言，准确、快速的诊断方法是控制布鲁氏菌病传播的关键