DB23T 2922-2021 水曲柳腋芽微繁技术规程.docxVIP

ICS65.020.01CCSB05

DB23

黑龙江省地方标准

DB23/T2922-2021

水曲柳腋芽微繁技术规程

2021-06-29发布2021-07-28实施

黑龙江省市场监督管理局发布

I

DB23/T2922-2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由黑龙江省林业和草原管理局提出。

本文件起草单位：东北林业大学、巴彦县双鸭山林场、绥棱县国有林场三吉台林场、黑龙江省山河屯林业局黑龙江省苇河林业局、哈尔滨市林业工作管理总站、黑龙江省庆安国有林场管理局、哈尔滨市呼兰区黄土山林场、黑龙江省应急救援保障中心、黑龙江省林业和草原第二调查规划设计院、五常市森林病虫防治检疫站、五常市林业工作总站、五常市胜利林场。

本文件主要起草人：詹亚光、齐凤慧、于磊、车德军、林显峰、曾凡锁、薛文辉、刘林、何利明、谢春风、赵晓军、张连生、李云庆、冯丹、代文栋、王培强、郑宏、王丽娜、李轶男、高群、夏晨、于航、高航、李晓彬。

DB23/T2922-2021

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水曲柳腋芽微繁技术规程

1范围

本文件规定了水曲柳（FraxinusmandshuricaRupr.）腋芽微繁的外植体采集与表面消毒、培养基选择及配制、组织培养程序、组培苗移栽、苗期管理和生产档案。

本文件适用于水曲柳腋芽微繁。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

LY/T1000容器育苗技术

LY/T1671水曲柳林人工培育技术规程

LY/T1882林木组织培养育苗技术规程

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4外植体采集与表面消毒

4.1外植体

采集水曲柳优树当年生穗条上带有顶芽或者腋芽的茎段作为组织培养的外植体。

4.2消毒

按LY/T1882的规定执行。

5培养基选择及配制

5.1初代培养基

WPM固体培养基，附加20g.L-1蔗糖、7g.L-1琼脂和1mg.L-16-BA（6-苄基腺嘌呤），pH=5.8~6.0。

5.2继代和分化培养基

继代培养基1为WPM液体培养基，附加30g.L-1蔗糖和0.6mg/LTDZ（噻苯隆）（pH=5.8~6.0）；

继代培养基2为WPM固体培养基，附加30g.L-1蔗糖、0.05mg·L-1TDZ、0.6mg·L-1BA和7g.L-1琼脂（pH=5.8~6.0）；

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芽分化增殖培养基为WPM固体培养基，附加30g.L-1蔗糖、1.0mg·L-1ZT（玉米素）和7g.L-1琼脂（pH=6.0~6.5）。

5.3生根培养基

生根培养为WPM固体培养基，附加20g.L-1蔗糖、1.4mg·L-1IBA（吲哚丁酸）、0.7mg·L-1NAA（萘乙酸）和7g·L-1琼脂（pH=5.8~6.0）。

5.4培养基母液的配制及保存

按LY/T1882的规定执行。

5.5培养基的灭菌

按LY/T1882的规定执行。

6组织培养

6.1条件

温度25±2℃,湿度60%~70%，光照16h无光8h交替培养，光照强度40μmol.m-2.s-1~80μmol.m-2.s-1；在无光条件下液体培养时，摇床转速60rpm.min-1。

6.2初代培养

取灭菌（121℃灭菌20min）的刀具、镊子、培养皿，将消毒的茎段放入培养皿中，切去茎节两端变褐部分露出新鲜组织，接入初代培养基中光照培养20d~30d，至芽萌发和生长。

6.3继代和分化增殖培养

萌发芽接种到继代培养基1中液体培养20d~30d，转入继代培养基2中，光照培养20d~30d，再转入芽分化增殖培养基，在光照条件下培养25d~35d，直至新芽分化。

6.4壮苗生根培养

新芽转接到生根培养基中，培养20d~30d后，待芽长至3cm~5cm长，基部形成不定根时，切下单个芽再转入生根培养基中，培养至根长约1cm。

7组培苗移栽

7.1基质配置

按LY/T1000的规定执行。

7.2环境要求

温度23℃~27℃、湿度60%~90%