2026年三维设计一轮高中总复习生物教师用-第58讲　基因工程的基本工具和基本操作程序.pptxVIP

第58讲基因工程的基本工具和基本操作程序;课程标准;1.破考点·抓必备;01;考点一基因工程的基本工具;提醒基因工程的理论基础;2.基因工程的基本工具

（1）限制性内切核酸酶（简称限制酶）;提醒①将一个基因从DNA分子上切割下来需要切两处，同时产生四个黏性

末端或平末端。

②原核生物的限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中不存在

该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。;（2）DNA连接酶;【教材拾遗】（选择性必修3P72旁栏思考）DNA连接酶和DNA聚合酶不

是一回事。原因是①DNA连接酶连接的是两个DNA片段，而DNA聚合酶

是把单个的脱氧核苷酸连接到已有的DNA片段上。②DNA聚合酶起作用时

需要以一条DNA链为模板，而DNA连接酶不需要模板。;（3）基因进入受体细胞的载体;;3.（选择性必修3P71正文）E.coliDNA连接酶既可连接平末端，又可连

接黏性末端。 （√）;;解析：不同限制酶识别的碱基序列一般不同，但切割后所产生的黏

性末端可能是一样的，像这种能切割不同的DNA片段但产生相同黏性

末端的一类限制酶称为同尾酶，A正确；T4DNA连接酶既可以连接双

链DNA片段互补的黏性末端，也可以连接双链DNA片段的平末端，催

化磷酸二酯键形成，B正确；作为载体的质粒上通常有抗生素抗性基因

作为标记基因，以便于重组DNA的筛选，不是抗生素合成基因，C错

误；原核生物内的限制酶可切割入侵的DNA分子而保护自身，一般不

切割自身的DNA分子，D正确。;2.（2025·山东济南高三期末）下列关于生物学中常见的几种酶的叙述，

正确的是（）;解析：黏性末端与黏性末端之间的互补配对的碱基自动形成氢键，

DNA连接酶催化形成磷酸二酯键，A错误；切下一个目的基因需要打开2个

切口，水解4个磷酸二酯键，故需消耗4个水分子，B正确；利用PCR仪扩

增DNA分子时常用耐高温的DNA聚合酶，C错误；对根尖分生区细胞进行

解离时用解离液处理，不需要纤维素酶，D错误。;题后归纳;3.限制酶和DNA连接酶是基因工程的工具酶，以下说法正确的是（）

A.限制酶只能切割双链DNA片段，不能切割烟草花??病毒的核酸

B.DNA连接酶能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段上形成磷酸二酯键

C.E.coliDNA连接酶只能连接黏性末端，不能连接平末端

D.限制酶主要从原核生物中分离纯化而来，所以也能剪切自身的DNA;考点二基因工程的基本操作程序;（2）利用PCR获取和扩增目的基因;提醒①在PCR过程中实际加入的原料为dNTP（即dATP、dGTP、dTTP、

dCTP），既可作为合成DNA子链的原料，又可为DNA的合成提供能量。;2.基因表达载体的构建（核心）;提醒启动子、起始密码子、终止子、终止密码子的区别;3.将目的基因导入受体细胞;提醒①农杆菌转化法中的两次拼接和两次导入：第一次拼接是将目的基因

拼接到Ti质粒的T-DNA上，第二次拼接（非人工操作）是指插入目的基因

的T-DNA拼接到受体细胞的染色体DNA上；两次导入：第一次导入是将含

目的基因的Ti质粒导入农杆菌，第二次导入（非人工操作）是指含目的基

因的T-DNA导入受体细胞。

②导入的目的基因，可能存在于细胞质中，也可能整合到染色体DNA上。

存在于染色体DNA上的目的基因有可能通过花粉传播进入杂草或其他作物

中，造成“基因污染”。;4.目的基因的检测与鉴定;;3.（选择性必修3P79旁栏思考）PCR技术扩增目的基因时不必知道基因的

全部序列，该技术既可以扩增DNA又可以扩增mRNA。 （×）;5.（选择性必修3P80旁栏思考）生物的所有DNA通过注射或花粉管通道

法转入植物细胞中，就可获得具有理想性状的转基因植物。

（×）;;解析：用图中引物②和引物⑤经过1次循环能获得含母链和引物②、母

链和引物⑤的两种双链DNA，经过2次循环能获得一条链为目的基因的碱

基序列的双链DNA，经过3次循环能获得两条链均为目的基因的DNA片

段，A正确；用图中引物③和引物④循环不能获得目的基因，因为合成的

新链是从引物的3开始延伸，用引物③和引物④延伸不包含目的基因的碱

基序列，B错误；合成新链是从引物的3开始延伸，C错误；用图中引物①

和引物⑤经过2次循环可获得3种双链DNA分子，D错误。;题后归纳;循环次数;2.（2024·福建厦门期末）研究人员拟利用如图所示的目的基因片段和质

粒构建基因表达载体。下列相关叙述错误的是（）;解析：据表可知，AvrⅡ和XbalⅠ切割后可产生相同的黏性末端，由图可

知，为了保证目的基因能正向接入载体，应选用SmaⅠ和XbalⅠ切割目的基

因，SmaⅠ和AvrⅡ