实验二细菌涂片的制备和染色镜检详解.ppt

实验二细菌涂片的制备和染色镜检详解演示文稿;优选实验二细菌涂片的制备和染色镜检;染色剂分类：;涂片染色程序：

涂片自然干燥固定染色干燥镜检

;细菌涂片示例：;实验内容：

1、?细菌抹片的制备：

玻片准备：透明、洁净、无油渍。

抹片：液体材料、非液体材料、组织脏器材料的抹片方法讲解、示范。

干燥固定：火焰固定和化学固定的示范。讲解其目的及注意事项。

2、?细菌涂片的制备：讲解并示范涂片、干燥、固定的方法。

3、?细菌常用染色方法：革兰氏染色法

;革兰氏染色法：

1.制片：取待检病料或细菌培养物常规抹（涂）片、干燥、固定。

2.初染：滴加结晶紫，染色1-2分钟，水洗。

3.媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1分钟，水洗。

4.脱色：用滤纸吸取或甩去载玻片上的残水，将载玻片倾斜，在白色背景下，用滴管流加95%乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时（20—30秒），立即水洗。

5.复染：用复红液复染约2分钟，水洗。

6.镜检：用滤纸吸水，干燥后，显微镜油镜观察。;革兰染色步骤;革兰染色时注意事项：

1、要用幼龄培养物作革兰染色；

2、涂片不宜太厚，以免脱色不完全造成假阳性;革兰阳性菌：细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞内而不被脱色，结果使细胞呈现紫色。

革兰阴性菌：细胞壁肽聚糖层薄，网状结构交联少，类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，因而细菌细胞被脱色，再经石炭酸复红复染后细胞呈红色。;革兰氏染色法原理：

革兰氏染色法将细菌分为G＋和G-，这由两类细菌细胞壁的结构和组成的不同而决定。用结晶紫初染后，所有的细菌都染上蓝紫色。碘作为媒染剂能与结晶紫结合形成结晶紫-碘的复合物，增强了染料与菌体的结合力。用乙醇脱色处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。G＋细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，且壁厚、类脂含量低，??乙醇脱色时使细胞壁脱水、网状结构孔径缩小，通透性降低，使得结晶紫—碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内。虽经洗脱和复染仍然保持初染剂的蓝紫色。G-细菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄，类脂含量高，所以在脱色处理时，类脂被乙醇溶解，细胞壁的通透性增大，使结晶紫—碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的颜色。

;革兰氏染色法过程示意图;当前13页，总共32页。;当前14页，总共32页。;涂片;显微镜放大法——细菌形体微小，肉眼不能直接看到，必须借助显微镜（普通光学显微镜、电子显微镜）放大后才能观察。

染色法——细菌体小半透明，经染色后才能观察较清楚。;普通光学显微镜的分辨率为0.25um。一般细菌都大于0.25um，故可用普通光学显微镜观察。;电子显微镜的分辨率为1nm。不仅能看清细菌的外形，内部超微结构可一览无余。;透射电镜;细菌的大小与形态;球菌(coccus);链球菌(streptococcus);球菌(coccus);球菌(coccus);球菌(coccus);杆菌(bacillus);杆菌的形态多样;杆菌(bacillus);螺形菌(spiralbacterium);细菌抗酸性染色;特殊染色法

是对细菌特殊结构进行染色的方法。包括芽胞染色、荚膜染色、鞭毛染色等。;谢谢大家！