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鸡源大肠杆菌对黏菌素的耐药性解析与野生型折点构建研究

一、引言

1.1研究背景与意义

鸡源大肠杆菌病是由大肠埃希杆菌的某些血清型引起的细菌性传染病的总称，是鸡群中最为严重的细菌病之一。随着养鸡业规模化、集约化程度的不断提高，鸡源大肠杆菌病的发生和流行日益严重，给养鸡业带来了巨大的经济损失。大肠杆菌病可导致鸡只生长发育受阻、饲料转化率降低、死亡率增加，还会影响蛋鸡的产蛋性能，使鸡蛋品质下降。据相关数据显示，鸡大肠杆菌病的发病率可高达30%以上，死亡率在5%-20%之间，在一些管理不善的养殖场，死亡率甚至可达到50%以上。此外，鸡大肠杆菌病还会引起其他疾病的发生，如呼吸道疾病、气囊炎、关节炎等，进一步加剧鸡只的死亡率和经济损失。

目前，防治鸡源大肠杆菌病的主要手段是使用抗生素。然而，随着抗生素的广泛使用，耐药菌株不断产生，使得抗菌药物的预防和治疗效果日益减弱。多重耐药革兰氏阴性菌感染的发生率不断上升，给养鸡业和公共卫生带来了严重威胁。黏菌素作为一种多肽类抗生素，对革兰氏阴性菌具有较强的抗菌作用，被视为临床治疗多重耐药革兰氏阴性菌的最后一道防线。在养鸡业中，黏菌素也被广泛用于预防和治疗鸡源大肠杆菌病。

随着黏菌素的大量使用，鸡源大肠杆菌对黏菌素的耐药性问题也日益凸显。耐药菌株的出现不仅降低了黏菌素的治疗效果，还可能通过食物链传播给人类，对公共卫生安全构成潜在威胁。因此，开展鸡源大肠杆菌对黏菌素的耐药性监测和研究具有重要的现实意义。

抗菌药物敏感性判定标准（折点）是开展病原菌耐药性监测及确定其耐药率、耐药水平的重要技术标准。其中，野生型折点（epidemiologicalcut-offvalue，ECV）是对病原菌耐药性表现的流行病学的监测，在最终折点建立之前，对细菌耐药性的发现和发展起到预警作用。目前，关于鸡源大肠杆菌对黏菌素的野生型折点尚未完全建立，这给耐药性监测和防控工作带来了一定的困难。因此，建立鸡源大肠杆菌对黏菌素的野生型折点，对于准确评估鸡源大肠杆菌对黏菌素的耐药性，指导临床合理用药，具有重要的理论和实践意义。

本研究旨在建立黏菌素对鸡源大肠杆菌的野生型折点，并对鸡源大肠杆菌对黏菌素的耐药性进行研究，分析其耐药机制和传播途径，为养鸡业中黏菌素的合理使用和鸡源大肠杆菌病的防控提供科学依据，从而保障养鸡业的健康发展，减少经济损失，同时降低耐药菌对公共卫生安全的潜在威胁。

1.2国内外研究现状

在国外，对鸡源大肠杆菌对黏菌素耐药性的研究开展较早。一些研究表明，随着黏菌素在养殖业中的广泛应用，鸡源大肠杆菌对黏菌素的耐药率呈上升趋势。有研究通过对多个养殖场的鸡源大肠杆菌进行检测，发现部分菌株对黏菌素表现出耐药性，且耐药菌株的比例在不同地区存在差异。在野生型折点建立方面，国外相关机构和研究团队也进行了大量工作。美国临床实验室标准化研究所（CLSI）等组织制定了一系列关于抗菌药物折点的标准和指南，但针对鸡源大肠杆菌对黏菌素的野生型折点，仍存在一些争议和不确定性。

国内对于鸡源大肠杆菌对黏菌素的耐药性研究也取得了一定成果。沈建忠院士团队的研究发现，我国畜禽源大肠杆菌中存在可转移的黏菌素耐药基因mcr-1，且该基因已在食品动物、零售肉类和人群中被检测到，揭示了养殖业使用多黏菌素和mcr-1流行是导致2009年以来耐药株迅速增长的主要原因。随着我国停止黏菌素作为饲料添加剂，鸡源大肠杆菌黏菌素耐药性显著下降。但目前仍有部分地区存在耐药菌株，且耐药机制复杂多样。在野生型折点研究方面，国内的研究相对较少，主要是参考国外的标准和方法，结合国内实际情况进行初步探索，但尚未形成统一、完善的标准。

当前研究仍存在一些不足和空白。不同地区的研究结果缺乏系统性和全面性的比较分析，难以准确评估全国范围内鸡源大肠杆菌对黏菌素的耐药现状。对于耐药机制的研究，虽然已发现一些耐药基因和相关机制，但仍有许多未知因素有待进一步探索。野生型折点的建立缺乏充分的国内数据支持，需要更多的研究来确定适合我国国情的折点标准，以更好地指导临床实践和耐药性监测工作。

1.3研究目标与内容

本研究的目标在于建立黏菌素对鸡源大肠杆菌的野生型折点，准确评估鸡源大肠杆菌对黏菌素的耐药性，并深入分析其耐药机制和传播途径，为养鸡业的健康发展和公共卫生安全提供科学依据。具体研究内容如下：

鸡源大肠杆菌的分离与鉴定：从不同地区的养鸡场采集病鸡样本，通过细菌培养、生化鉴定等方法，分离和鉴定鸡源大肠杆菌，为后续研究提供菌株资源。

黏菌素对鸡源大肠杆菌的药敏试验：采用微量肉汤稀释法等标准药敏试验方法，测定黏菌素对分离得到的鸡源大肠杆菌的最低抑菌浓度（MIC），统计分析MIC数据，初步评估鸡源大肠杆菌对黏菌素的耐药情况。

野生型折点的建立：参照美国临床实验室标准化研究