仪器分析第三章高效液相色谱分析.pptxVIP

2025/10/2第三章

高效液相色谱分析HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC

3-1高效液相色谱法的特点

高效液相色谱法：一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典液相色谱的基础上，引入气相色谱的理论，技术上采用了高压泵、高效分离柱、高灵敏度检测器。

高效液相色谱与经典液相色谱方法的比较高压：HPLC采用高压输液设备,150-350*105Pa高速：HPLC流速大增，分析速度极快，只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。高效：化学键和固定相,30000塔板/米高灵敏：10-9g（紫外检测）、10-11g（荧光检测）

HPLC与GC的区别2025/10/2分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物，而这些物质只点有机物总数的20%；HPLC可以分析高沸点、高分子量、热稳定或不稳定化合物，这类物质占有机物总数的80%。1流动相的选择：GC采用的流动相中为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用，和组分之间没有相互的作用力；HPLC采用的流动相为各种极性不同的液体或液体的混合，可供选择的机会多。它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。2操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。3

=2ldp+2025/10/2§3-2高效液相色谱法理论基础速率理论P69CdDmu+CmdP2CSmdP2Csdf2DmDmDs++uH=A++CuBu由于柱内色谱峰扩展所引起的塔板高度的变化为：

影响柱效的主要因素是传质项。速率方程：H=A+B/u+Cu液体的扩散系数仅为气体的万分之一，HPLC中速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，

提高柱效的途径：2025/10/2提高柱内填料均匀性，减小固定相粒度（选择薄壳形担体）选用低粘度的流动相或适当提高柱温，降低流动相粘度;减小粒度是最有效的途径.030102

3-3高效液相色谱法主要类型及分离原理液固吸附色谱法离子对色谱液液分配色谱法离子交换色谱法空间排阻色谱法

液-液分配色谱固定相与流动相均为液体（互不相溶）；分离机制：组分在固定相和流动相上的分配；流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相色谱），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相色谱）。固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用;目前应用最广的固定相:化学键合固定相

正相色谱与反相色谱比较1正相色谱——固定液极性流动相极性极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱适于分离极性组分2反相色谱——固定液极性流动相极性极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱适于分离非极性组分3反相色谱：固定相：C-18柱4流动相：甲醇-水或乙腈-水5

2、液-固吸附色谱2025/10/2基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；固定相：固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样缺点：非线性等温吸附常引起峰的拖尾；

离子对色谱（分离有机酸、有机碱）原理：流动相中加入离子对试剂，使被测组分的溶质离子与其电荷相反的对离子形成中性离子对，以改善分离分析酸（阴离子分离）：常采用烷基铵类，如：氢氧化四丁基铵分析碱（阳离子分离）：常采用烷基磺酸类，如：己烷磺酸钠；反相离子对色谱：固定相：非极性的疏水键和相(C-18柱)流动相：含有对离子的甲醇-水或乙腈-水

4、离子交换色谱2025/10/201固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；基本原理：组分在固定相上发生的离子交换反应；不同组分与离子交换剂之间亲和力的大小不同。应用：在溶液中可电离的物质，氨基酸、核酸、蛋白质等生物大分子。0203

2025/10/25、空间排阻色谱

固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)；原理：按分子大小分离。小分子可以进入到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。全部在死体积前出峰；可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离

3-4液相色谱固定相2025/10/2液-液分配及离子对分离固定相全多孔型担体由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；早期采用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳。现采用10μm以下的小颗粒123654现在5