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硼替佐米耐药骨髓瘤细胞株的构建与耐药机制深度剖析

一、引言

1.1研究背景与意义

多发性骨髓瘤（MultipleMyeloma，MM）是一种常见的血液系统恶性肿瘤，严重威胁人类健康。在血液系统恶性肿瘤中，MM的发生率约占10%，随着全球人口老龄化进程的加速，其发病率在我国呈逐年上升趋势。据相关研究统计，在我国每10万人中就有约1.6个多发性骨髓瘤患者，且发病年龄相较于其他国家更低。MM起病隐匿，早期症状不典型，容易被忽视，许多患者早期认知不足，经历骨质疏松、骨痛等情况却容易以为是中老年常见疾病，从而延误诊断和治疗。临床上，MM患者常出现高钙血症、肾功能损害、贫血和骨病等症状，严重影响患者的生活质量和生存期。尽管目前针对MM的治疗手段包括化疗、放疗、造血干细胞移植以及新型分子靶向药物等不断发展，但MM仍然是一种不可治愈性疾病，患者终将面临复发困境，且复发次数越多，治疗难度越大，无进展生存和复发后的生存时间也越短。

蛋白酶体抑制剂硼替佐米（Bortezomib/PS-341，商品名VELCADE?）的出现，为MM的治疗带来了新的希望。硼替佐米是哺乳动物细胞中26S蛋白酶体糜蛋白酶样活性的可逆抑制剂，通过靶向作用于泛素-蛋白酶体系统，抑制核因子κB（nuclearfactor-kappaB，NF-κB）的活性，从而发挥抗肿瘤作用。它能够诱导包括地塞米松、美法仑以及沙利度胺耐药MM细胞在内的多种MM细胞产生凋亡，在MM的治疗中展现出较好的疗效。临床研究表明，采用硼替佐米联合MP（VMP方案）治疗60例65岁及以上的老年初诊MM患者，总反应率高达89%，CR率为32%，16个月的无事件生存率（EFS）达到93%；而历史对照的MP方案总反应率仅为42%，16个月的EFS为51%。基于这些显著的疗效，骨髓瘤诊疗指南中将VD（硼替佐米+地塞米松）、PAD（硼替佐米+地塞米松+阿霉素）、MPV（美法仑+强的松+硼替佐米）等方案推荐用于初发及移植候选的MM患者；对于难治性MM，硼替佐米单药及硼替佐米联合脂质体阿霉素被作为I类推荐，硼替佐米+地塞米松方案作为2A类推荐。

然而，随着硼替佐米在临床治疗中的广泛应用和时间的推移，耐药问题逐渐凸显，成为限制其疗效的关键因素。部分MM患者在接受硼替佐米治疗后，会对其产生耐药反应，或者在初期治疗有效的患者中出现耐药及疾病复发的情况。研究发现，MM患者中硼替佐米耐药主要与NF-κB途径、热休克蛋白及BCL蛋白家族的过表达现象有关。耐药的产生不仅导致治疗效果降低，使患者的生存期和生活质量大大降低，还会增加治疗费用，给患者家庭和社会带来沉重的经济负担。因此，深入研究硼替佐米的耐药机制具有至关重要的意义。

建立硼替佐米耐药的MM细胞株，是深入探究其耐药机制的关键基础。通过对耐药细胞株进行研究，可以从细胞和分子层面揭示硼替佐米耐药的内在机制，为临床应用蛋白酶体抑制剂治疗MM、监测和避免治疗中耐药的发生提供坚实的实验依据。同时，耐药细胞株也为抗耐药药物的筛选提供了理想的细胞模型，有助于研发新的治疗方法和药物，以期达到逆转耐药、提高疗效的目的，为MM患者带来更多的治疗选择和更好的生存希望。

1.2国内外研究现状

在硼替佐米耐药骨髓瘤细胞株的建立方面，国内外学者已经开展了一系列研究。通常采用浓度递增法，从最低耐药剂量开始，每次逐步加大硼替佐米的剂量，让细胞在每个剂量下都能存活并繁殖，经过多次筛选和长期培养，最终成功获得硼替佐米耐药的骨髓瘤细胞系。例如，国内有研究以人多发性骨髓瘤KM3细胞株为亲本，运用浓度梯度递增法，成功建立了耐硼替佐米的多发性骨髓瘤细胞株KM3/BTZ，其耐药倍数达到19.7倍，且与亲代细胞相比，耐药细胞株倍增时间延长。国外也有类似研究，采用浓度递增法自MM细胞系NCI-H929建立了硼替佐米耐药株NCI-H929B，MTT实验测得硼替佐米对亲本NCI-H929和NCI-H929B24h的IC50分别为20.7nmol/L和487.4nmol/L，耐药倍数为23.5。

对于硼替佐米耐药机制的研究，国内外取得了一定的进展，但仍存在许多未知领域。目前已知硼替佐米耐药机制与多种生物学过程的异常密切相关。在蛋白酶体通路方面，细胞可以通过增加蛋白酶体通路的活性，合成更多抗氧化蛋白保护细胞免受氧化损伤，或者减少蛋白酶体通路的靶点，降低细胞对硼替佐米的响应能力，从而逃避硼替佐米的抑制作用。DNA修复过程也与耐药相关，硼替佐米通过抑制DNA修复酶的活性，促进DNA双链断裂