基因工程常用的工具酶.pptVIP

第1页，共34页，星期日，2025年，2月5日限制性核酸内切酶：简称限制酶。是一类能识别双链DNA分子中某种特定的核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶20世纪50年代发现：λ噬菌体E.coliBPFU10-4E.coliBPFU1λ噬菌体DNA被降解DNA被修饰E.coliB限制性核酸内切酶：降解外来DNA防御修饰酶：DNA甲基化保护寄主细胞控制的限制与修饰系统（R/M体系）！第2页，共34页，星期日，2025年，2月5日一、限制酶的种类限制修饰活性酶蛋白结构相对分子质量切割位点切割作用辅助因子实用性代表Ι型酶Ⅱ型酶Ⅲ型酶同时存在单独存在同时存在多亚基结构单亚基结构两个亚基30万dal2-10万dalΙ、Ⅱ之间与识别位点不一致与识别位点一致与识别位点不一致Mg2+、ATP、SAMMg2+Mg2+、SAM低高低EcoK、EcoBHindⅡEcoPΙ第3页，共34页，星期日，2025年，2月5日二、限制酶的命名命名原则限制酶寄主微生物属名头字母（大写）和种名前两字母（小写）表示寄主物种菌株名位于其后罗马数字表示同一寄主菌株的不同限制修饰系统HaemophilusinfluenzaedHindΙ、HindⅡ、HindⅢ属名种名株名不同限制修饰系统第4页，共34页，星期日，2025年，2月5日三、Ⅱ型限制酶的特性-识别序列识别双链DNA分子中特定的4-8对核苷酸序列5‘…GCTGAATTCGAG…3’3‘…CGACTTAAGCTC…5’EcoRI的识别序列EcoRI的切割位点5‘…GAGGCCGAG…3’3‘…CTCCGGCTC…5’HaeⅢ的识别序列HaeⅢ的切割位点第5页，共34页，星期日，2025年，2月5日大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧部分限制酶能识别多种核苷酸序列5‘…GCGTPyPuACGAG…3’3‘…CGCAPuPyTGCTC…5’HindⅡ的识别序列PydCMP、dTMPPudAMP、dGMP第6页，共34页，星期日，2025年，2月5日识别序列呈典型的旋转对称型回文结构5‘…GCTGAATTCGAG…3’3‘…CGACTTAAGCTC…5’EcoRI的识别序列EcoRI的切割位点回文结构:两条核苷酸链的核酸序列呈双重旋转对称排列的DNA双螺旋结构第7页，共34页，星期日，2025年，2月5日三、Ⅱ型限制酶的特性-切割后形成的末端粘性末端：5‘…GTGAATTCGA…3’3‘…CACTTAAGCT…5’EcoRI5‘…GTGAATTCGA…3’3‘…CACTTAAGCT…5’平齐末端：5‘…GAGGCCGAG…3’3‘…CTCCGGCTC…5’5‘…GAGGCCGAG…3’3‘…CTCCGGCTC…5’HaeⅢ彼此具有互补核苷酸的单链延伸末端第8页，共34页，星期日，2025年，2月5日三、Ⅱ型限制酶的特性-同尾酶、同裂酶同尾酶:来源各异、识别序列也不相同，但都产生相同粘性末端的一类限制酶