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PCR上岗证考试试题及答案

一、单项选择题（每题5分，共50分）

PCR反应的基本步骤依次是（）

A.退火→变性→延伸B.变性→退火→延伸C.延伸→变性→退火D.变性→延伸→退火

答案：B。PCR反应需先通过高温（90-95℃）使模板DNA变性解链，再降温（50-65℃）让引物与模板退火结合，最后升温（72℃左右）使DNA聚合酶催化延伸合成子链，此为标准三步法流程。

下列关于PCR引物设计的说法，错误的是（）

A.引物长度一般为18-25bpB.引物自身避免形成发夹结构C.上下游引物之间可存在大量互补序列D.引物3’端避免出现连续相同碱基

答案：C。上下游引物若存在大量互补序列，易形成引物二聚体，干扰PCR反应，降低产物特异性与产量，其余选项均为引物设计的基本原则。

PCR反应中使用的TaqDNA聚合酶，主要特点是（）

A.低温活性高B.具有3’→5’外切酶活性C.热稳定性强D.需依赖RNA模板

答案：C。Taq酶来自嗜热菌，可耐受PCR变性步骤的高温（90-95℃），在72℃左右活性最高；其无3’→5’外切酶活性（无校正功能），且依赖DNA模板，不依赖RNA。

核酸提取过程中，为避免RNA酶污染导致RNA降解，下列操作错误的是（）

A.使用无RNA酶的离心管和枪头B.操作时佩戴一次性手套并勤更换C.直接用自来水配制提取缓冲液D.提取后立即进行逆转录或低温保存

答案：C。自来水含大量RNA酶，会降解RNA，需用无RNA酶的超纯水配制缓冲液；其余操作均为防止RNA酶污染的关键措施。

实时荧光定量PCR（qPCR）中，Ct值的含义是（）

A.反应体系中DNA总量B.荧光信号达到设定阈值时的循环数C.PCR反应的最大延伸效率D.引物与模板的结合效率

答案：B。Ct值（循环阈值）是qPCR中判断模板初始浓度的核心指标，Ct值越小，说明初始模板浓度越高；其与DNA总量、延伸效率、结合效率无直接对应关系。

PCR反应体系中，dNTP的作用是（）

A.提供反应能量B.作为DNA合成的原料C.维持体系pH稳定D.抑制非特异性扩增

答案：B。dNTP（脱氧核苷三磷酸）是DNA合成的原料，在DNA聚合酶作用下，其5’端磷酸基团与引物3’端羟基连接，形成磷酸二酯键；ATP可提供能量，缓冲液维持pH，引物设计或退火温度调节抑制非特异性扩增。

下列哪种情况可能导致PCR出现假阴性结果（）

A.模板DNA浓度过高B.引物特异性差C.DNA聚合酶失活D.反应体系中存在气溶胶污染

答案：C。DNA聚合酶失活会导致无法催化DNA合成，直接出现假阴性；模板浓度过高可能导致抑制效应，但未必完全无产物；引物特异性差易出现假阳性；气溶胶污染多导致假阳性。

PCR实验室分区中，哪个区域需严格避免与其他区域交叉污染（）

A.试剂准备区B.样本处理区C.扩增区D.产物分析区

答案：D。产物分析区是PCR产物的检测区域，产物浓度高，若其气溶胶扩散到其他区域（如试剂准备区、样本处理区），会导致后续实验出现假阳性，因此需严格隔离，人员、器材均不与其他区域共用。

对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳时，溴化乙锭（EB）的作用是（）

A.促进DNA片段迁移B.染色使DNA片段可视化C.防止DNA降解D.提高电泳分辨率

答案：B。EB可插入DNA双链的碱基对之间，在紫外光照射下发出橙红色荧光，从而使凝胶中的DNA片段显现，便于观察；DNA迁移依赖电场力，EDTA可防止DNA降解，凝胶浓度影响分辨率。

逆转录PCR（RT-PCR）与普通PCR的主要区别是（）

A.反应温度不同B.需先将RNA逆转录为cDNAC.无需DNA聚合酶D.不需要引物

答案：B。RT-PCR用于检测RNA，需先通过逆转录酶将RNA逆转录为互补DNA（cDNA），再以cDNA为模板进行普通PCR扩增；两者反应温度范围相近，均需DNA聚合酶和引物。

二、判断题（每题4分，共20分，对的打“√”，错的打“×”）

PCR反应中，模板DNA浓度越高，扩增效率越高，产物量越多。（）

答案：×。模板浓度过高会导致反应体系中引物、dNTP等耗材过早耗尽，或因模板间相互作用产生抑制，反而降低扩增效率，甚至出现非特异性产物，需将模板稀释至适宜浓度（通常