鸡白细胞介素18双抗体夹心ELISA检测方法的构建与初步应用探究.docxVIP

鸡白细胞介素18双抗体夹心ELISA检测方法的构建与初步应用探究

一、引言

1.1研究背景

鸡白细胞介素18（ChickenInterleukin-18，ChIL-18）作为一种关键的细胞因子，在鸡的免疫调节过程中发挥着不可或缺的作用。它最早被视为γ-干扰素诱导因子（IGIF），能够诱导T细胞和自然杀伤细胞（NK细胞）产生γ-干扰素（IFN-γ），在鸡体的免疫防御机制中占据重要地位。

在抗病毒感染方面，ChIL-18表现出显著的功效。当鸡受到病毒侵袭时，机体会迅速启动免疫应答，此时ChIL-18能够诱导T细胞和NK细胞活化，促进IFN-γ的大量产生。IFN-γ作为一种重要的抗病毒细胞因子，可作用于感染细胞，通过激活一系列抗病毒蛋白的表达，如蛋白激酶R（PKR）、2-5-寡腺苷酸合成酶（2-5-OAS）等，来抑制病毒的复制和传播，从而帮助鸡体抵御病毒的侵害。例如，在鸡感染禽流感病毒（AIV）时，ChIL-18能够增强机体对AIV的免疫应答，降低病毒在鸡体内的滴度，减轻病毒感染引起的病理损伤，提高鸡的存活率。

在细菌感染的免疫防御中，ChIL-18同样发挥着重要作用。它能够激活巨噬细胞和中性粒细胞等免疫细胞，增强它们的吞噬能力和杀菌活性。巨噬细胞在ChIL-18的刺激下，会表达更多的一氧化氮合酶（iNOS），产生大量的一氧化氮（NO），NO具有强大的杀菌作用，可有效杀灭入侵的细菌。此外，ChIL-18还能促进炎症细胞因子如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等的分泌，进一步增强炎症反应，招募更多的免疫细胞到感染部位，共同清除细菌病原体。

对于寄生虫感染，ChIL-18也参与了鸡体的免疫调节过程。它能够调节T细胞亚群的平衡，促进Th1型免疫反应的发生，增强机体对寄生虫的抵抗力。在鸡感染球虫等寄生虫时，ChIL-18可以诱导IFN-γ的产生，IFN-γ能够激活巨噬细胞，使其释放活性氧（ROS）和活性氮（RNS）等物质，抑制球虫的生长和繁殖，减轻寄生虫感染对鸡体造成的损害。

在疫苗免疫中，ChIL-18作为免疫佐剂展现出巨大的潜力。将ChIL-18与疫苗联合使用，可以显著增强疫苗的免疫效果。它能够促进抗原呈递细胞（APC）的活化，提高APC对抗原的摄取、加工和呈递能力，从而增强T细胞和B细胞对疫苗抗原的免疫应答。ChIL-18还可以调节细胞因子网络，促进Th1型免疫反应的偏向性发展，增强细胞免疫和体液免疫水平。例如，在鸡新城疫疫苗的免疫中，添加ChIL-18作为佐剂，能够提高鸡血清中特异性抗体的水平，增强淋巴细胞的增殖活性和细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的杀伤活性，显著提高疫苗对鸡新城疫病毒的免疫保护效果。

鉴于ChIL-18在鸡免疫调节和疾病防控中的重要作用，建立一种准确、灵敏、特异的ChIL-18检测方法显得尤为必要。目前，虽然已经有一些检测ChIL-18的方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、蛋白质免疫印迹法（Westernblot）、实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）等，但这些方法存在一定的局限性。例如，Westernblot操作繁琐，需要大量的样本和专业的技术人员，且灵敏度相对较低；qRT-PCR只能检测ChIL-18的mRNA表达水平，无法直接反映蛋白质的表达和活性；传统的ELISA方法在灵敏度和特异性方面也有待提高，难以满足对ChIL-18进行精确检测的需求。因此，开发一种更为高效、可靠的ChIL-18检测方法，对于深入研究ChIL-18的生物学功能、评估鸡的免疫状态、监测鸡群疾病的发生和发展以及优化疫苗免疫策略等方面都具有重要的意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在建立一种高灵敏度、高特异性的鸡白细胞介素18双抗体夹心ELISA检测方法，并对其进行初步应用。具体而言，通过制备针对ChIL-18的特异性单克隆抗体和多克隆抗体，优化ELISA反应条件，建立标准曲线，实现对鸡血清、组织匀浆等样本中ChIL-18含量的准确检测。

在养鸡业中，鸡病的防控一直是保障养殖效益的关键环节。准确检测鸡体内ChIL-18的含量，能够及时了解鸡群的免疫状态，为疾病的早期诊断和预防提供重要依据。当鸡群受到病原体感染时，ChIL-18的表达水平会发生变化，通过本检测方法可以快速检测到这种变化，有助于及时采取相应的防控措施，减少疾病的传播和损失。对于一些免疫抑制性疾病，如鸡传染性法氏囊病，感染后会导致鸡体免疫系统受损，ChIL-18的表达也会受到影响。利用本检测方法监测ChIL-18水平，能够及时发现鸡群是否处于免疫抑制