兽残分析中样品的采集保存制备与前处理技术及方法建立步骤.ppt

*2.3.1液-液萃取是一种利用待测组分与样品杂质在互不相溶的两相中溶解性差异进行净化的方法。原理：分配常数影响因素：溶剂、pH、离子对试剂、盐析、其他操作方法：分液漏斗震荡法、涡旋萃取、逆逆流萃取、特殊容器萃取等脱水、乳化、吸附损失2021/3/20*2.3.2固相萃取优点：可以净化很小体积的样品、溶剂用量小、选择性高、速度快、不会发生乳化、引入杂质少。SPE柱结构:柱体、固定相和滤板3部分。固定相类型：正相、反相、离子交换相固定相的选择：非极性或低极性选用反相固定相，中等极性物质反相或正相固定相均可应用，离子型或较强的有机酸、有机碱可选择离子交换固定相为保证上样时样品被充分保留，样品介质应为弱溶剂。2021/3/20固相萃取分离机制与溶剂选择分离机制弱溶剂（保留条件）强溶剂（洗脱条件）反相水、缓冲液或低浓度的甲醇或乙腈甲醇、乙腈或溶剂与水的混合物正相正己烷、甲苯等二氯甲烷、甲醇等阳离子交换低离子强度缓冲液高离子强度缓冲液低反离子强度高反离子强度pH＞固定相pKapH＜固定相pKapH＜分析物pKapH＞分析物pKa阴离子交换低离子强度缓冲液高离子强度缓冲液低反离子强度高反离子强度pH＜固定相pKapH＞固定相pKapH＞分析物pKapH＜分析物pKa*2021/3/20*SPE方法的建立和操作-固定相活化目的是创造一定的溶剂环境和除去柱内杂质。一般首先使用一种强洗脱能力的溶剂（始溶剂）润湿和净化SPE柱，然后再用弱洗脱能力的溶剂（终溶剂）平衡SPE柱。一般每100毫克固定相用1-2毫升溶剂平衡。活化过程中和上样前不要让柱内液体流干和空气进入，否则柱床会出现裂隙，影响回收率、重复性和净化效果。终溶剂的强度与样品溶剂接近或更低，以免样品被带出造成回收率下降。活化对净化效果十分重要，不当的活化常是导致净化失败和分析误差的来源2021/3/20*SPE方法的建立和操作-样品上柱SPE柱容量一般为固定相中重量的1%-3%。流速越低，净化效果越好，一般1-10毫升/分钟。稳定的流速对保证净化的重复性是重要的。在保证样品溶解时应尽可能使用弱溶剂溶解样品，使组分在柱上有强保留，用较小溶剂体积即可将组分洗脱，也可减少杂质流出。样品的溶剂强度过高或体积过大可能造成穿漏，是回收率降低。有时样品必须用强溶剂提取，可用弱溶剂稀释至适宜的强度。2021/3/20*SPE方法的建立和操作-洗涤、洗脱洗涤：是为了除去不需要的组分或杂质，所用溶剂一般略强于或等于样品溶剂。洗脱：洗脱溶剂必须谨慎选择，以保证用较小体积的溶剂将组分淋洗下来，并且避免溶剂太强洗出不必要的组分。洗涤或洗脱溶剂的体积一般为0.5-0.8毫升/100毫克。使用混合溶剂是获得适宜强度溶剂的有效方法。利用洗脱分布图可以快速选择溶剂和固定相。2021/3/20*2.3.3基质固相分散技术其基本操作是将样品直接与适量反相键合硅胶一起混合和研磨，使样品被均匀分散于固定相颗粒表面，制成半固态装柱，然后用类似与SPE的操作进行洗涤和洗脱。样品与填料的比例通常为1：4特点：处理样品速度快，溶剂用量少，但样品量小，要求检测方法具有较高的灵敏度。2021/3/20*2.3.4免疫亲合色谱使用连接有抗体的惰性基质作为固定相。对某种或某类残留组分选择性吸附和富集，是残留分析中有效的净化方法之一。免疫吸附柱能重复使用2021/3/20*2.3.5制备色谱法包括制备HPLC和TLC制备HPLC通常作为一种补充手段，用于常规方法难以净化的样品或对净化要求高的分析方法。将样品溶液注入制备型液相色谱仪，收集一定时间段的流出组分，浓缩后测定。制备TLC净化中，经点样、展开和干燥后将药物斑点剥离，用溶剂将药物浸出，浓缩后测定。2021/3/20*2.3.6其他膜分离技术分子印迹技术凝胶渗透色谱固相微量萃取：是一种基于液-固吸附平衡的样品富集方法，是一种无溶剂萃取方法，适用于挥发性或半挥发性组分的测定。吹扫-捕集：是用惰性气体将液体样品或样品提取液中的挥发性物质驱赶到气相中，再带入一个收集阱中收集后进行分析。用于环境样品或高脂肪样品中挥发性物质的净化。浸透限制固定相：可选择性地保留小分子药物而排除大分子蛋白质，达到净化和富集的目的。磺化：浓硫酸与样品中的脂肪、油脂、蜡质或色素等干扰物质反应，生成高极性的水溶性产物，经有机溶剂分配后除去。低温冷冻：动物组织中的脂肪、蜡质和水分等杂质在低温溶剂中沉淀析出，经离心或过滤后除去。凝结剂沉淀法：将提取液浓缩，样品溶于丙酮，加入凝结剂使蛋白、色素等杂质沉淀除去