Agtpbp1基因敲除小鼠模型的构建及初步表型分析.pdfVIP

中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2025，41（7）：1449-1456·1449·

杂志网址：https://www.cjpp.net

［文章编号］1000-4718（2025）07-1449-08

·研究方法与实验技术·

Agtpbp1基因敲除小鼠模型的构建及

初步表型分析*

11111，2231△

常越，宋婧源，杨晨曦，宋呼德尔，鲁厚可，张传领，任建军，肖瑞

12

（内蒙古医科大学内蒙古自治区分子病理学重点实验室，内蒙古呼和浩特010059；内蒙古医科大学药学院，

3

内蒙古呼和浩特010110；内蒙古医科大学附属医院肝胆胰脾外科，内蒙古呼和浩特010051）

［摘要］目的：采用CRISPR/Cas9技术构建并繁育出携带ATP/GTP结合羧肽酶1（Agtpbp1）基因敲除纯合子

（Agtpbp1−/−）不育模型小鼠，为后续探究Agtpbp1基因在雄性不育中的发病机制提供动物模型。方法：采用CRISPR/

Cas9技术，根据Agtpbp1基因的主要蛋白功能区域的数据结果并结合Cas9核酸酶以此获取Agtpbp1基因敲除杂合子

（Agtpbp1+/-）小鼠。将所获得杂合子小鼠雌雄交配，对其后代使用PCR和琼脂糖凝胶电泳进行基因型结果判定。利

用RT-PCR、Westernblot和免疫组化染色检测Agtpbp1在不同水平上的表达情况，佐证鉴定结果。HE染色观察小鼠

小脑及眼球结构以此来分析Agtpbp1基因敲除对浦肯野细胞和光感受器细胞的影响。结合行为学测试观察小鼠的

共济失调症状。观察小鼠生长情况，分析雄性小鼠睾丸组织体积及重量变化，HE染色观察睾丸结构变化，PAS染色

观察睾丸生殖细胞周期变化，最后利用精子分析仪分析小鼠精子活力，以此来分析小鼠的生长发育情况。结果：

杂合子雌雄小鼠可继续交配，后代可获得3种基因型：Agtpbp1野生型（Agtpbp1+/+）、Agtpbp1+/-和Agtpbp1−/−，用PCR成

功鉴定出子代小鼠的基因型。RT-PCR、Westernblot和免疫组化染色分别在不同水平验证Agtpbp1−/−小鼠模型构建

成功（P0.05）。HE染色结果显示，Agtpbp1−/−小鼠小脑中丢失浦肯野细胞且眼球中感光细胞数量减少。行为学测

试证实，Agtpbp1−/−小鼠存在运动功能障碍、动作不协调等共济失调症状。与对照组相比，Agtpbp1−/−小鼠睾丸体积和

重量均显著降低。HE染色观察到Agtpbp1−/−小鼠睾丸中极少量精子出现，结合精子分析仪观察到该小鼠精子无论

是活率、活力还是运动速率，均显著低于对照组。睾丸切片PAS染色结果显示，Agtpbp1−/−小鼠精子发生周期发生阻

滞。结论：本研究成功繁育出Agtpbp1全身敲除模型小鼠。Agtpbp1的缺失引起成年雄性小鼠生精细胞分化阻滞，

精子活力降低而出现不育。本研究为进一步探究Agtpbp1引起雄性不育的分子机制提供了新的实验工具。