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《GB/T28228-2011入出境船舶压舱水中单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法》实施指南

目录

一、标准核心解析：为何单核细胞增生李斯特氏菌检验是入出境船舶压舱水安全的关键？

二、样品采集实操：如何遵循标准确保压舱水样品代表性与检验准确性？

三、样品处理技巧：预处理环节如何规避干扰，为后续检验筑牢基础？

四、培养分离要点：不同培养基在目标菌分离中的作用及规范操作

五、菌株鉴定方法：从形态到生化，标准中鉴定流程的专家视角解读

六、结果判定规则：如何精准理解标准中阳性结果的判定依据与边界？

七、质量控制体系：检验全流程中哪些关键节点需落实质控要求？

八、设备与试剂管理：符合标准的设备校准与试剂选用有哪些门道？

九、行业趋势适配：未来五年跨境船舶检验中该标准的应用方向预测

十、常见问题解答：检验实操中高频疑点的标准依据与解决思路

一、标准核心解析：为何单核细胞增生李斯特氏菌检验是入出境船舶压舱水安全的关键？

（一）单核细胞增生李斯特氏菌的危害：为何成为压舱水检验的重点对象

该菌是典型食源性致病菌，兼具嗜冷性，能在低温环境存活繁殖。压舱水若携带此菌，入境后排放会污染水体、土壤，进而污染食品链，威胁公众健康。且其易引发败血症、脑膜炎等，对免疫力低下人群风险更高，这正是标准将其列为必检项的核心原因。

（二）入出境船舶压舱水的特殊性：为何是该菌传播的高风险载体

船舶压舱水为调节平衡而装载，可能来自不同港口水域，易混合各地微生物。船舶航行中温湿度变化又为菌提供存活条件。其排放量巨大，若未检验管控，会成该菌跨区域传播的重要途径，这凸显了检验的必要性。

（三）本标准的定位：在入出境船舶卫生检疫体系中扮演的角色

本标准是入出境船舶压舱水微生物检验的专项技术规范，为检验提供统一方法。它衔接《国境卫生检疫法》等法规，是检疫部门执法、企业自查的技术依据，保障了检验结果的权威性和一致性，在检疫体系中起基础支撑作用。

二、样品采集实操：如何遵循标准确保压舱水样品代表性与检验准确性？

（一）采样前准备：船舶信息核查与采样工具的合规性要求

采样前需核查船舶航线、压舱水装载港口等信息，预判污染风险。采样工具需用无菌材料，且需经高压灭菌等处理，确保无菌。按标准，工具使用前需做无菌验证，避免自身污染影响样品，这是保证后续检验准确的前提。

（二）采样点位选择：不同舱室与深度的采样策略

要在压舱水舱不同区域设采样点，包括前部、中部、后部及不同深度。因舱内水体可能分层，不同点位菌浓度有差异。标准要求每个舱至少采3个点位样品混合，提升代表性，避免单点采样的偶然性。

（三）采样量与保存：标准规定的采样体积及样品运输中的条件控制

按标准，每舱采样量不少于1000ml。采样后需立即标记，在0-4℃冷藏保存，24小时内送达实验室。低温可抑制菌繁殖，保证样品中菌数量与原始状态一致，超时限或温度不当会导致结果失真。

三、样品处理技巧：预处理环节如何规避干扰，为后续检验筑牢基础？

（一）样品混匀与均化：打破水体不均确保检验样品的一致性

压舱水可能有沉淀、悬浮颗粒，需用无菌搅拌器充分混匀。对含大量杂质的样品，可通过无菌纱布过滤初步处理。标准强调混匀要温和避免菌损伤，均化处理能让菌均匀分布，确保后续取样检验的准确性。

（二）干扰物质去除：针对高盐、高浊度样品的处理方案

高盐样品可加入无菌生理盐水稀释，降低盐浓度至适合菌培养的范围；高浊度样品可采用低速离心（3000r/min，5min），取上清液用于检验。标准明确处理过程中不能使用抑菌物质，避免影响目标菌存活。

（三）样品浓缩：低浓度菌样品的富集处理方法

当预计菌浓度低时，可通过离心浓缩（8000r/min，15min），弃上清保留沉淀，再用少量缓冲液重悬。也可采用滤膜过滤法，用0.45μm无菌滤膜过滤样品，再将滤膜放入增菌液中。这些操作需严格无菌，按标准控制时间和转速。

四、培养分离要点：不同培养基在目标菌分离中的作用及规范操作

（一）增菌培养：选择合适增菌液及培养条件的标准要求

常用缓冲蛋白胨水作为增菌液，按1:10比例将样品加入增菌液。培养条件为30-35℃，振荡培养24-48h。增菌液能促进目标菌繁殖，抑制部分杂菌，标准规定振荡速度为120-150r/min，保证菌充分接触营养物质。

（二）选择性培养基的选用：PALCAM琼脂与牛津琼脂的应用差异

PALCAM琼脂含头孢他啶等抑制剂，能抑制革兰阴性菌，目标菌菌落呈黑色有晕圈；牛津琼脂含李斯特菌显色底物，目标菌呈蓝色菌落。标准建议同时使用两种培养基，可提高分离率，避免单一培养基的漏检。

（三）培养温度与时间控制：为何严格遵循30-37℃培养区间

该菌在30-37℃生长旺盛，温度过低生长缓慢，过高可能抑制生长甚至导致死亡。标准规定平板培养