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2025/07/18

用于检测碳青霉烯酶酶型的检测试剂和方法

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CONTENTS

目录

01

检测试剂的种类

02

检测方法的原理

03

检测操作步骤

04

检测方法的应用范围

05

检测方法的优缺点

检测试剂的种类

01

基于颜色变化的试剂

亚甲蓝法

亚甲蓝法通过观察颜色变化来检测碳青霉烯酶，颜色由蓝变白表明酶活性存在。

铬天青S法

铬天青S试剂在与碳青霉烯酶反应后，颜色会从蓝色变为紫色，用于快速筛选。

改良的CarbaNP试验

该试验通过颜色变化来指示碳青霉烯酶的存在，颜色变化从黄色变为红色或紫色。

基于荧光标记的试剂

荧光共振能量转移（FRET）试剂

FRET试剂通过荧光标记的供体和受体分子间的能量转移来检测碳青霉烯酶活性。

荧光偏振免疫测定（FPIA）试剂

FPIA试剂利用荧光标记的抗体与抗原结合产生的偏振信号变化来定量分析碳青霉烯酶。

基于质谱检测的试剂

质谱检测原理

质谱技术通过测量分子质量来鉴定化合物，用于检测碳青霉烯酶酶型的试剂依赖此原理。

试剂盒组成

试剂盒通常包括质谱分析所需的缓冲液、底物和内标等，以确保检测的准确性和重复性。

应用案例

例如，使用质谱检测的试剂盒可以快速鉴定KPC、NDM等碳青霉烯酶酶型，提高临床诊断效率。

检测方法的原理

02

酶抑制法原理

底物竞争性抑制

通过添加特定底物，观察其与酶的结合能力，判断酶活性是否被抑制。

非竞争性抑制

利用非底物分子与酶结合，改变酶的构象，从而抑制酶活性。

分子生物学原理

聚合酶链反应（PCR）

利用PCR技术扩增目标DNA序列，通过特定引物检测碳青霉烯酶基因的存在。

基因测序技术

通过Sanger测序或高通量测序技术，对碳青霉烯酶基因进行精确序列分析。

质谱分析

使用质谱技术分析蛋白质分子量，从而鉴定碳青霉烯酶的特定亚型。

分子克隆与表达

将碳青霉烯酶基因克隆到表达载体中，通过表达产物的活性来确定酶型。

免疫学原理

底物竞争性抑制

通过加入特定底物，观察其对酶活性的影响，以确定是否存在竞争性抑制剂。

酶活性检测

利用比色法或荧光法检测酶与底物反应后的产物，从而判断酶活性是否被抑制。

检测操作步骤

03

样本准备

荧光共振能量转移（FRET）试剂

FRET试剂通过荧光标记的供体和受体分子间的能量转移来检测碳青霉烯酶活性。

荧光偏振免疫测定（FPIA）试剂

FPIA试剂利用荧光标记的抗体与抗原结合时荧光偏振的变化来定量分析碳青霉烯酶。

试剂添加

亚甲蓝法

亚甲蓝试剂与碳青霉烯酶反应后，颜色由蓝变白，用于快速检测特定酶型。

铬天青S法

铬天青S试剂与某些碳青霉烯酶反应产生颜色变化，用于区分不同类型的酶。

碘量法

碘量法通过测定反应前后碘的消耗量来检测碳青霉烯酶活性，颜色变化指示酶的存在。

检测设备使用

基质辅助激光解吸电离技术（MALDI）

MALDI-TOFMS用于快速鉴定碳青霉烯酶，通过分析蛋白质质量指纹图谱。

电喷雾电离技术（ESI）

ESI-MS/MS技术能够对碳青霉烯酶进行精确的分子量测定和结构分析。

液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）

LC-MS/MS结合色谱分离和质谱鉴定，用于检测和定量碳青霉烯酶的表达水平。

结果解读

聚合酶链反应（PCR）

利用PCR技术扩增目标DNA序列，通过特定引物检测碳青霉烯酶基因的存在。

基因测序

对PCR产物进行测序，分析基因序列变异，确定碳青霉烯酶的精确类型。

质谱分析

通过质谱技术分析蛋白质分子量，识别碳青霉烯酶的特异性肽段。

基因芯片技术

使用基因芯片检测多种碳青霉烯酶基因，实现快速、高通量的基因分型。

检测方法的应用范围

04

临床诊断

底物竞争性抑制

通过加入竞争性底物，观察酶活性的变化，以判断是否存在碳青霉烯酶。

酶活性检测

利用特定的荧光或色度底物，通过酶活性变化来定量分析碳青霉烯酶的存在。

微生物研究

荧光共振能量转移（FRET）试剂

FRET试剂通过荧光标记的供体和受体分子间的能量转移来检测碳青霉烯酶活性。

荧光偏振免疫测定（FPIA）试剂

FPIA试剂利用荧光标记的抗体与抗原结合时荧光偏振度的变化来识别特定的酶型。

抗生素耐药性监测

底物竞争性抑制

通过添加竞争性底物，观察酶活性的变化，以判断是否存在碳青霉烯酶。

酶活性检测

利用特定的荧光或色度底物，通过酶活性变化来检测碳青霉烯酶的存在。

检测方法的优缺点

05

灵敏度和特异性分析

亚甲蓝法

亚甲蓝试剂与碳青霉烯酶反应后，颜色由蓝变白，用于快速检测特定酶型。

铬天青S法

铬天青S试剂与某些碳青霉烯酶作用后，溶液颜色从无色变为蓝色，用于酶活性测定。

碘量法

碘量法通过测定与碳青霉烯酶反应前后碘的消耗量，颜色变化指示酶的存在。

操作便捷性评价

01

聚合酶链反应（PCR）

利用PCR技术扩增目标DNA序列，通过特