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基于二代测序技术的生物实验方案设计与应用研究

目录

文档概览．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.2二代测序技术发展历程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.3二代测序技术原理及特点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

1.4国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

1.5本研究的主要内容及目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

二代测序技术相关理论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

2.1基因组测序概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

2.2二代测序技术分类．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

2.3第二代测序关键技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

2.3.1DNA文库构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

2.3.2序列扩增．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

2.3.3序列检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

2.4常用二代测序平台介绍．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

2.5二代测序数据分析流程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

基于二代测序技术的生物实验方案设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

3.1实验目的明确化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

3.2实验对象选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

3.3样本采集与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

3.3.1样本类型．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

3.3.2样本存储．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

3.4实验方法选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

3.4.1基因组测序．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

3.4.2转录组测序．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

3.4.3差异基因表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

3.4.4精准医学测序．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

3.4.5其他应用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

3.5实验参数优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44

3.6实验质量控制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46

3.7实验方案评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46

基于二代测序技术的生物实验应用研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47

4.1在遗传病诊断中的应用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48

4.1.1单基因遗传病．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50

4.1.2多基因遗传病．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51

4.2在肿瘤研究中的应用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52

4.2.1肿瘤基因组变异分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53

4.2.2肿瘤靶向治疗．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53

4.2.3