《靶向二代测序在感染性疾病诊疗中的规范化应用专家共识2025》解读读(1).docxVIP

《靶向二代测序在感染性疾病诊疗中的规范化应用专家共识2025》解读

引言

感染性疾病一直是临床诊疗中的重点与难点，及时、准确地明确病原微生物对于疾病的有效治疗和患者预后的改善起着决定性作用。近年来，随着医学技术的飞速发展，靶向二代测序（targetednext-generationsequencing，tNGS）凭借其独特的技术优势和出色的检测性能，在感染性疾病的诊断领域中崭露头角，受到了越来越多的关注。

tNGS通过前置捕获和富集特定病原体的核酸，随后开展高通量测序以及生物信息学分析，能够显著提升病原体的数据量及其在测序结果中的占比，进而提高检测的灵敏度。与传统的病原学检测方法相比，tNGS的检测范围更为广泛，能够同时靶向检测上百种病原体，并且具有更高的检出率。相较于宏基因组二代测序（metagenomicnext-generationsequencing，mNGS），tNGS能够降低测序量，减少检测成本，从而减轻患者的医疗负担。然而，目前tNGS在临床应用中的规范化程度还存在不足，在应用场景的界定、样本采集的规范、实验室检测的流程、临床结果的解读以及质量控制等多个方面都存在差异，这在一定程度上限制了tNGS技术优势的充分发挥和合理应用。

为了填补这一空白，进一步规范tNGS在感染性疾病诊疗中的应用，中国医学装备协会检验医学分会自2023年4月起组织来自国内外41家机构的54位专家共同编写《靶向二代测序在感染性疾病诊疗中的规范化应用专家共识2025》。经过多次开会研讨、临床调研、文献检索以及反复的意见征集与修改，最终形成了包含29条专家共识的规范性文件，旨在为临床医生、检验人员、微生物专家、感控及公共卫生部门人员等提供科学、权威的指导，促进tNGS技术的规范应用与发展推广，为感染性疾病的精准诊疗提供有力保障。

一、tNGS技术原理与特点

（一）技术原理

tNGS技术主要分为基于液相探针杂交捕获建库的靶向测序和基于超多重聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）扩增建库的靶向测序。基于液相探针杂交捕获建库的靶向测序，是利用设计好的特异性探针与目标病原体核酸进行杂交，将目标核酸捕获并富集后再进行测序。这些探针能够特异性地识别并结合目标病原体的特定基因区域，从而实现对目标核酸的精准捕获。例如，对于常见的呼吸道病原体，可设计针对其关键基因的探针，如流感病毒的血凝素基因、呼吸道合胞病毒的融合蛋白基因等。基于超多重PCR扩增建库的靶向测序，则是通过设计多对特异性引物，对目标病原体的核酸进行超多重PCR扩增，将扩增产物进行测序。引物的设计需要针对不同病原体的保守区域或特异性区域，确保能够高效、特异地扩增目标核酸。此外，在测序平台的选择上，除了常见的二代测序平台，还可以使用基于单分子纳米孔测序技术路线的靶向测序进行病原体的鉴定。单分子纳米孔测序技术具有无需扩增、实时测序等独特优势，能够直接对单分子核酸进行测序，对于一些难以扩增的病原体或特殊的核酸结构检测具有重要意义。

（二）技术特点

相对于mNGS，tNGS具有诸多显著特点。tNGS具有靶向性，其检测范围主要针对常见、致病相对明确的100-300种病原微生物，而90%以上mNGS阳性检出病原微生物种类不超过200种。tNGS测序数据量要求低，这是因为其通过靶向捕获和富集，使得目标病原体核酸在测序样本中的占比较高，无需大量的测序数据即可获得有效的检测结果。生信分析难度低，由于检测范围相对固定且明确，生物信息学分析过程中无需对海量的未知序列进行分析和比对，降低了分析的复杂性。检测成本低，减少了不必要的测序量和数据分析工作量，使得检测成本大幅下降。灵敏度高，通过前置的捕获和富集步骤，能够有效提高病原体核酸的浓度和检测信号，从而提高检测的灵敏度。检测周期短，较短的测序时间和相对简单的数据分析流程，使得tNGS能够在更短的时间内出具检测报告。与传统病原学检测方法（如涂片、培养、免疫学、PCR等）相比，tNGS具有更广泛的检测范围和更高的检出率，能够检测出传统方法难以检测到的病原体。

二、tNGS与mNGS的区别

tNGS和mNGS都是以高通量测序和生物信息学分析为基础，用于辅助诊断病原微生物的技术手段，但二者在多个方面存在明显差异。在检测范围上，mNGS无偏倚地检测几千甚至上万种微生物，涵盖了几乎所有类型的病原体；而tNGS主要针对常见、致病相对明确的100-300种病原微生物，检测范围相对较窄。在检测成本方面，mNGS需要对大量的核酸进行测序和分析，成本较高；tNGS由于测序数据量要求低，成本相对较低。从检测性能来看，mNGS检测灵敏度极易受人源背景的干扰，而tNGS通过靶向富集，提高了病原体的数据