《铁皮石斛干细胞生产技术规程》DB32T 5148-2025.docxVIP

ICS65.020.01CCSB31

江苏省地方标准

DB32/T5148—2025

铁皮石斛干细胞生产技术规程

Codeofpracticeforstemcellsfromdendrobiumofficinale

2025-07-01发布2025-08-01实施

2025-07-01发布

江苏省市场监督管理局中国标准出版社

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布版

Ⅰ

DB32/T5148—2025

目次

前言 Ⅲ

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4生产条件 1

5种源干细胞获取、筛选与增殖 1

6培育生产 2

7扩大生产 3

8采收 3

9生产记录 3

参考文献 4

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Ⅲ

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由江苏省农业农村厅提出并组织实施。

本文件由江苏省园艺标准化委员会归口。

本文件起草单位：江苏省农业科学院、苏州普朗特尔皮肤细胞科技有限公司、西交利物浦大学、苏州珀立科技服务有限公司、思格（苏州）生物科技有限公司、苏州工业园区服务外包职业学院。

本文件主要起草人：陈小龙、张杰、吴红升、余向阳、宋立晓、周燕群、王牧、任宝永、李毅、覃鸿妮。

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铁皮石斛干细胞生产技术规程

1范围

本文件规定了铁皮石斛干细胞室内培育的生产条件，种源干细胞获取、筛选与增殖，培育生产，扩大生产，采收和生产记录。

本文件适用于铁皮石斛干细胞室内培育生产。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB5749生活饮用水卫生标准

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

铁皮石斛干细胞stemcellsfromdendrobiumofficinale

从铁皮石斛茎尖离体培养愈伤组织，经培育，获得的迅速稳定增殖的植物干细胞。

4生产条件

室内环境洁净度应达到十万级以上，温度为25℃~28℃,光照强度1800lx~2000lx（增殖阶段为完全黑暗），相对湿度为40%~70%。生产用水应符合GB5749，过滤水应符合GB/T6682。

5种源干细胞获取、筛选与增殖

5.1培养基配制

5.1.1诱导固体培养基

采用1/2MS+2mg/LNAA+0.5mg/L6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L琼脂进行种源干细胞的固体培养。

5.1.2种源干细胞增殖培养基

采用1/2MS+1mg/L6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L琼脂进行固体培养增殖。

2

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5.2种源干细胞获取

5.2.1材料选取

应选取良种铁皮石斛植物体茎尖端5mm的组织。

5.2.2消毒

用质量分数为0.1%的升汞溶液消毒。

5.2.3组织切碎

将尖端组织切成0.1mm的碎块，使植物静止中心组织暴露。

5.2.4愈伤组织培养

将上述组织碎块置于愈伤组织诱导固体培养基（MS基础培养基+1.0mg/LNAA+0.8mg/L6-BA+25g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH值5.8）中，25℃~26℃黑暗条件下培养21d~28d，获得愈伤组织。

5.2.5愈伤组织细胞增殖

在相同固体培养基和培养条件下增殖愈伤组织细胞。

5.3筛选与纯化

5.3.1清理

愈伤组织细胞增殖后，每10d将死亡的、褐化的以及玻璃化的愈伤组织清理出培养体系。

5.3.2筛选

筛选留存淡黄色或淡绿色、生长茁壮、均一的种源干细胞，用于进一步培养。经过20代培养后，逐渐筛选到干细胞。

5.4种源干细胞增殖

按照鲜重0.2g/cm2~0.3g/cm2接种量，将种源