PDH在PLA2R相关膜性肾病足细胞损伤中的作用.pdfVIP

福建医科大学硕士学位论文

目录

中文摘要1

英文摘要3

前言5

材料与方法8

1材料8

1.1研究对象8

1.2主要试剂9

1.3主要仪器耗材10

1.4主要试剂配制11

2实验方法11

2.1生物信息学分析方法11

2.1.1数据预处理及标准化11

2.1.2差异化基因筛选12

2.1.3GSEA富集分析和KEGG富集分析12

2.1.4蛋白质间相互作用网络12

2.2临床样本的收集及处理13

2.2.1血液标本的收集及保存13

2.2.2肾活检组织的收集及保存13

2.2.3ELISA检测血清PLA2R-Ab的水平13

2.2.4ProteinA亲和纯化人血清IgG14

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2.2.5BCA法测IgG浓度15

2.2.6免疫荧光观察人肾小球足细胞PLA2R定位及PDH、p-PDH、

TOM20表达15

2.2.7透射电子显微镜观察线粒体形态结构16

2.3足细胞培养17

2.3.1足细胞复苏17

2.3.2足细胞换液17

2.3.3足细胞传代18

2.3.4足细胞计数19

2.3.5足细胞冻存19

2.3.6足细胞分化及同步化19

2.4IgG诱导足细胞20

2.5PLA2R-IgG诱导下加入TM-1对足细胞的影响20

2.6ELISA检测足细胞PDH活性20

2.7WesternBlot检测足细胞蛋白的表达水平21

2.8免疫荧光观察足细胞Nephrin定位及PDH、p-PDH、TOM20表达

23

2.9流式细胞仪检测细胞ROS24

2.10免疫荧光观察线粒体活性氧24

2.11线粒体膜电位检测25

2.12细胞ATP含量检测25

2.13细胞黏附实验26

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2.14透射电子显微镜观察足细胞线粒体形态结构26

3统计学处理27

结果28

1GSE216841表达谱差异分析结果28

1.1数据预处理及标准化28

1.2差异基因（DEGs）筛选28

1.3GSEA分析与KEGG分析28

1.4蛋白质-蛋白质间相关作用网络31

2PLA2R相关膜性肾病中低PLA2R抗体滴度组与高PLA2R抗体滴度

组的比较分析33

2.1临床收集膜性肾病情况33

2.2PLA2R相关膜性肾病患者不同PLA2R抗体的滴度水平的临床参

数分析33

2.3血清PLA2R抗体在不同滴度PLA2R相关膜性肾病患者中的表达

水平34

2.4免疫荧光观察人肾小球足细胞PDH、p-PDH及TOM20的表达35

2.5透射电镜观察人肾小球足细胞线粒体结构36

3PLA2R-IgG及PDK抑制剂刺激人足细胞后线粒体氧化磷酸化的变

化38

3.1PLA2R-IgG作用时间和浓度及PDK抑制剂作用浓度38

3.1.1PLA2R-IgG在不同时间点刺激人足细胞后PDH活性的变化38

3.1.2不同浓度PLA2R-IgG刺激人足细胞后PDH活性的变化...38

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3.1.3不同浓度PDK抑制剂（TM-1）刺激人足细胞后PDH活性的变

化39

3.2PLA2R-IgG及TM-1刺激人足细胞后PDH、p-PDH、TOM20的免疫

荧光变化40

3.3PLA2R-IgG及TM-1刺激人足细胞后PDH、p-PDH、TOM20的蛋白

表达变化42

3.4PLA2R-IgG及TM-1刺激人足细胞后细胞ROS的变化43

3.5PLA2R-IgG及TM-1刺激人足细胞后线粒体ROS的变化43

3.6PLA2R-IgG及TM-1刺激人足细胞后细胞ATP含量的变化..45

3.7PLA2R-IgG及TM-1刺激人足细胞后线粒体膜电位的变化..45

3.8PLA2R-IgG及TM-1刺激人足细胞