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2025/07/14

免疫固定电泳操作规程

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CONTENTS

目录

01

操作前的准备

02

免疫固定电泳操作步骤

03

操作注意事项

04

结果分析与解读

05

后续处理与质量控制

操作前的准备

01

设备与材料准备

准备电泳仪

确保电泳仪处于良好工作状态，检查电源连接和电泳槽是否清洁无损。

准备凝胶板

根据实验需求选择合适浓度的凝胶板，提前制备并确保凝胶质量。

准备缓冲液

准备适量的电泳缓冲液，确保其pH值和离子强度符合实验要求。

样本处理与标记

样本的采集与保存

采集血液样本后，应立即冷藏并在规定时间内进行处理，以保证样本质量。

样本的标记与记录

样本容器上需贴上明确的标签，记录患者信息和采集时间，确保样本的可追溯性。

免疫固定电泳操作步骤

02

电泳过程

样品制备

将待测血清与缓冲液混合，确保样品适合电泳分析。

电泳分离

在电场作用下，不同电荷和分子量的蛋白质在凝胶中迁移速率不同，实现分离。

染色与脱色

电泳后，使用染色剂对蛋白质带进行染色，然后通过脱色步骤去除背景。

结果分析

通过比较标准样品的迁移距离，对分离的蛋白质进行定性和定量分析。

免疫固定

样本准备

收集患者血清样本，确保样本无污染，准备用于免疫固定电泳分析。

电泳分离

将样本置于凝胶上进行电泳，根据蛋白质电荷和大小进行分离，形成清晰的条带。

染色与脱色

染色步骤

在免疫固定电泳中，染色步骤是将凝胶上的蛋白质带染上颜色，以便于观察和分析。

脱色过程

脱色是为了去除多余的染料，确保蛋白质带清晰可见，便于后续的图像分析。

染色剂的选择

选择合适的染色剂对于提高免疫固定电泳结果的准确性和可重复性至关重要。

结果观察与记录

样本的采集与保存

采集血液样本后，应立即冷藏并在规定时间内进行处理，以保证样本质量。

样本的标记与记录

样本需贴上唯一标识，并准确记录相关信息，如患者姓名、采集时间等，确保可追溯性。

操作注意事项

03

安全操作规程

样本准备

收集患者血清样本，确保样本无污染且在适宜条件下保存，以备后续分析。

电泳分离

将样本在凝胶上进行电泳分离，根据蛋白质电荷和大小的不同，形成不同的区带。

抗体孵育

在电泳分离后，将特定抗体加入凝胶中，使抗体与相应的蛋白结合形成免疫复合物。

染色与分析

对固定后的凝胶进行染色，通过显色反应观察并分析特定蛋白的位置和浓度。

样本与试剂处理

染色步骤

在免疫固定电泳中，染色是通过特定染料标记蛋白带，以便于观察和分析。

脱色过程

脱色是为了去除多余的染料，确保电泳图谱清晰，便于后续的图像分析。

染色剂选择

选择合适的染色剂对提高免疫固定电泳的灵敏度和特异性至关重要。

设备维护与校准

准备电泳仪

确保电泳仪处于良好工作状态，检查电源、电极和电泳槽是否清洁无损。

准备凝胶

根据实验需求选择合适浓度的凝胶，提前制备或购买，确保凝胶质量。

准备缓冲液

准备适量的电泳缓冲液，检查pH值和离子强度是否符合实验要求。

结果分析与解读

04

结果判断标准

样本采集

采集血液样本时需注意无菌操作，确保样本不被污染，以便进行免疫固定电泳分析。

样本标记

样本采集后应立即进行标记，记录患者信息和采集时间，防止样本混淆或错误分析。

异常结果分析

样品制备

将待测血清与缓冲液混合，确保样品适合电泳分析。

电泳分离

在电场作用下，不同电荷和分子量的蛋白质在凝胶中迁移速率不同，实现分离。

染色与脱色

电泳后，使用特定染料对蛋白质带进行染色，然后进行脱色以便于观察。

结果分析

通过比较标准蛋白带的位置，分析样品中蛋白质的种类和含量。

后续处理与质量控制

05

结果报告

样本的采集与保存

采集血液样本后，需立即冷藏并在规定时间内进行处理，以保证样本质量。

样本的标记与记录

样本容器上应贴有明确的标签，记录患者信息和采集时间，确保样本的可追溯性。

质量控制措施

染色步骤

将电泳后的凝胶浸入染色液中，使用特定染料如考马斯亮蓝或银染法进行染色。

脱色过程

染色后的凝胶需要经过脱色步骤，以去除背景色，使蛋白带清晰可见。

染色效果评估

通过比较染色前后凝胶的差异，评估染色效果是否均匀，以及是否需要调整染色时间。

THEEND

谢谢