项目一生物产品分析与检验基础任务高效液相色谱法84课件.pptVIP

高效液相色谱法

知识目标了解液相色谱仪的结构能认识色谱图理解气相色谱与液相色谱的异同点。技能目标学会液相色谱仪的调节学会液相色谱仪的使用1.了解色谱分析的相关概念2.能够正确解释色谱分离过程3.能够根据组分性质选择合适的色谱类型高效液相色谱法的分类液相色谱法的分离机理是基于混合物中各组分对两相亲和力的差别。根据固定相的不同，液相色谱分为液固色谱、液液色谱和键合相色谱。应用最广的是以硅胶为填料的液固色谱和以微硅胶为基质的键合相色谱。根据固定相的形式，液相色谱法可以分为柱色谱法、纸色谱法及薄层色谱法。按吸附力可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶渗透色谱。液固吸附色谱液液分配色谱键合相色谱离子交换色谱法凝胶色谱分离机理（分子排阻色谱法）液固吸附色谱法固定相：吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5-10μm流动相：有机溶剂适用于分离分子量200-1000的组分，大多数用于非离子型化合物的分离，常用于分离同分异构体。液液分配色谱法固定相将特定的液态物质涂于担体表面化学键合于担体表面而形成的有机键合层如C18（十八烷基硅烷）、C8（辛烷基）、氨基键合硅胶固定相类型极性固定相：正相色谱以极性有机基团如胺基（-NH2）、腈基（-CN）、醚基（-O-）等键合在硅胶表面制成的非极性固定相：反相色谱反相色谱法最常用的固定相是C18、C8和苯基键合相的填料，在分离极性很大的化合物时，也可以采用氨基、氰基等极性基团键合固定相。使用条件为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值，但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5（2~8）。太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。离子交换色谱法固定相:离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基阳离子交换树脂在表面未端芳环上接上季胺基阴离子交换树脂流动相：电解质溶液、有机弱酸或有机弱酸盐溶液离子交换色谱法分离原理树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换而分离。应用离子交换色谱法主要用于分析阴，阳离子，凡是在溶剂中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法来进行分离。分析物质有机酸、氨基酸、多肽及核酸。

以凝胶(gel)为固定相。它类似于分子筛，但凝胶的孔径比分子筛要大得多。小分子量的化合物可以进入孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。常用于分离高分子化合物，如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。正确地选择色谱类型尽可能多的了解样品性质化学结构极性和稳定程度水中和有机溶剂中溶解度相对分子质量的大小熟悉各种色谱类型主要特点应用范围高效液相色谱仪的使用*项目一生物产品分析与检验基础生物产品分析与检验课程组任务高效液相色谱法液相色谱法（第一部分）知识目标能力目标1.能熟练进行液相色谱仪使用前的准备工作2.能正确使用液相色谱仪液相色谱是如何完成混合物的分离？混合物中各组分在固定相和流动相之间会发生吸附、溶解或其他亲和作用，这种作用存在差异，从而使各组分在色谱柱中的迁移速度不同而得到分离石油醚碳酸钙颗粒色素玻璃柱几种典型的色谱的分离机理液固吸附色谱各组分的出峰顺序极性较小组分，吸附力较弱，容易解吸，先流出。极性较大组分滞留作用大，后流出。饱和烃烯芳烃醚醛酮酸吸附脱附再吸附再脱附…分离过程是一个吸附－脱附的平衡过程。液固吸附色谱法分离机理液固吸附色谱分离机理液液分配色谱1.非极性固定相C18（简称ODS）、C82.极性流动相水或缓冲液3.极性调节剂???甲醇、乙腈、四氢呋喃4.分离非极性和极性较弱化合物占整个HPLC应用的80%左右5.组分流出顺序极性大先洗出1.极性固定相聚乙二醇、氨基与腈基键合相2.相对非极性流动相正已烷、环已烷3.极性调节剂???乙醇、四氢呋喃、三氯甲烷4.分离中等极性和极性较强化合物.???酚类、胺类、羰基类及氨基酸类5.组分流出顺序极性小先洗出反相色谱法正相色谱法液液分配色谱键合相色谱—固定相特点使用过程中