DNA重组技术的基本工具名师.pptxVIP

P211走进高考第一题一基因工程的定义和原理：定义—课本原理：基因工程实现异种生物的基因转移，能够使受体获得新基因，体现出新性状，是一种广义的基因重组。在体外完毕。自然界的实例：噬菌体感染细菌后其DNA整合到细菌的DNA上，属基因重组，但是在生物体内完毕。1不同生物的DNA分子含有相似构造2基因是控制生物性状的基本构造单位和功效单位。3多个生物共用一套遗传密码4中心法则二基因工程或DNA重组技术的基本工具：1工具酶：（1）限制性核酸内切酶——基因剪刀?或手术刀（2）DNA连接酶——基因缝合针或针线2运载体——基因的运输工具1.1DNA重组技术的基本工具

T磷酸二酯键1234512345A1限制性核酸内切酶——基因剪刀?或手术刀工具（1）来源（2）特性：①识别DNA分子特定的核苷酸序列（识别的核苷酸序列有6、4、5、8个脱氧核苷酸）；②有特定的酶切位点。（3）作用部位：两个相邻核苷酸的磷酸二酯键（而不是脱氧核苷酸内部的酯键）

什么叫黏性末端？例EcoRⅠ限制酶识别的回文序列被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的脱氧核糖核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。限制酶特点？专一性识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。不识别RNA(4)成果：产生黏性末端或平末端（由于切割方式不同造成的）什么叫平末端？例SmaⅠ限制酶识别的回文序列

2基因的针线——DNA连接酶DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一种重组的DNA分子就形成了。DNA连接酶对所连接的两端的核苷酸序列无专一性磷酸二酯键工具(1)作用部位是:

限制酶切割后有两种不同的成果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时，所用DNA连接酶与否能够不加选择？E.coliDNA连接酶：只连接黏性末端T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端DNA连接酶对所连接的两端的核苷酸序列无专一性(2)分两类：

DNA连接酶DNA聚合酶限制酶连接两个DNA分子成一个双链连接单个脱氧核苷酸成一条DNA单链一个DNA分子作用部位在两DNA片段之间形成磷酸二酯键将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键切断两个相邻脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键作用结果将存在的DNA片段连接成重组DNA分子合成新的DNA分子形成黏性末端或平末端作用实质：都是催化两个相邻脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键作用底物区别DNA连接酶、DNA聚合酶、限制酶

3、基因进入细胞的载体——分子运输车能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别、筛选。1种类：2载体含有三个的条件：对受体细胞无害每种酶切位点最佳只有一种，避免环状DNA分子打开，丢失某些片断。3最惯用的是质粒，且通过人工改造的4受体细胞：（1）种类（2）导入受体细胞方式

其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端，能够互补结合？其对的的末端互补序列为什么？BamHI和BgIⅡ；末端互补序列－GATC－