概述微生物培养的一般步骤培养条件的控制微生物培养技术09课.ppt

第五节微生物的培养概述微生物培养的一般步骤培养条件的控制微生物培养技术概述培养：在人为设定的环境中让微生物生长、繁殖的过程叫培养培养物：培养后获得的微生物群体称为培养物纯培养：只有一种微生物的培养叫纯培养，所得到的培养物叫纯培养物。混菌培养（混合培养）：含有两种或两种以上的微生物的培养叫混菌培养，所得到的培养物叫混合培养物。二元培养：有些微生物的纯培养是很难做到的，如果培养时只培养两种微生物而且这两种微生物是有特定关系的，这种培养就是二元培养。微生物培养的一般步骤培养器皿（设备）的清洗和灭菌接种培养基的制备和灭菌培养成品培养条件的控制控制培养基成分合理选择适宜的营养物质营养物质浓度及配比合适理化学条件适宜应满足培养的目的控制培养条件适宜控制合适的培养温度控制合适的湿度控制合理的氧气含量微生物培养法实验室规模的培养工业上大规模的培养分批培养连续培养需氧培养厌氧培养静置培养摇瓶培养通气培养台式发酵罐深层穿刺培养吸氧培养Hungate液管技术培养厌氧培养皿培养厌氧罐培养厌氧手套箱培养固体培养液体培养浅盘培养发酵罐深层培养恒浊连续培养恒化连续培养静置培养在实验室里，将已接种的试管、三角瓶、培养皿等，置于培养箱中进行培养，由于试管或其它容器内总是与空气接触的，因而微生物可获得生长所需要的氧气。摇瓶培养（即振荡培养）操作：将三角瓶上盖8~12层纱布或用疏松的棉塞塞住，以阻止空气中杂菌或杂质进入瓶内，然后放到特制的摇床上以一定速度保温振荡，可以改善液体中氧气和二氧化碳气体的传送。为使菌体获得足够的氧，一般装液量为三角瓶的10%以下。有时，为了提高搅拌效果，增加通气量，也可在三角瓶内设置挡板或添加玻璃珠等。通气培养台式发酵罐实验室用的发酵罐体积一般为几升到几十升。商品发酵罐的种类很多，一般都有各种自动控制和记录装置，如有pH、溶解氧、温度和泡沫监测电极，有加热或冷却装置，有补料、消泡和调节PH用的酸碱贮罐及其自动记录装置，大多由计算机控制。它的结构与生产用的大型发酵罐接近，因而它是实验室模拟生产实践的主要试验工具。厌氧微生物的培养关键：使微生物处于无氧或氧化还原电势低的环境中除氧方法机械除氧：抽真空，以CO2或N2代替空气，穿刺接种、表面封层等化学吸氧：利用一些物质与氧发生化学反应消耗掉氧生物法：利用新鲜的无菌动植物组织的呼吸作用、某些动物组织中的还原性化合物的氧化作用、与需氧性微生物共同培养等方式将氧除去。深层穿刺培养用于非严格厌氧的微生物。取一玻管，一端塞入橡皮塞，一端加棉塞，玻管中加入琼脂培养基，灭菌后穿刺接种吸氧培养Hungate液管技术培养主要原理是利用除氧铜柱来制备高纯氮，以次驱除小环境中的空气。将微生物接种到融化的培养基中，然后将特制的试管（见图）用丁基橡胶塞严密塞住后平放，置冰浴中均匀滚动，使含菌的培养基布满在试管的内表面，犹如好氧菌在培养基平板表面一样，最后长出许多单菌落。厌氧培养皿培养有的利用皿盖底有两个相互隔开的空间，其中一个放焦性没食子酸，另一个放NaOH溶液，待在皿盖平板上接入待培养的厌氧菌后，立即密闭。摇动使焦性没食子酸和NaOH溶液接触，发生吸氧反应，造成无氧环境厌氧罐培养法厌氧手套箱培养分批培养将微生物置于一定容积的培养基中，经过培养生长，最后一次性收获产品的培养方式，称分批培养。同步培养法利用实验室技术控制细胞的生长，使它们处于同一生长阶段，所有的细胞都同时分裂，这种生长方式叫同步生长能使培养的微生物比较一致，生长发育在同一阶段上的培养方法叫同步培养法用同步培养法所得到的培养物叫同步培养物采用同步培养技术就可以用研究群体的方法来研究个体水平上的问题。连续培养如果在培养器中不断补充新鲜营养物质，并及时不断地以同样速度排出培养物(包括菌体及代谢产物)，从理论上讲，对数生长期就可无限延长。只要培养液的流动量能使分裂繁殖增加的新菌数相当于流出的老菌数，就可保证培养器中总菌量基本不变,此种方法就叫连续培养法。控制连续培养的方法恒浊连续培养不断调节流速而使细菌培养液浊度保持恒定的连续培养方法叫恒浊连续培养恒化连续培养控制恒定的流速，使由于细菌生长而耗去的营养及时得到补充，培养室中营养物浓度基本恒定，从而保持细菌的恒定生长速率，故称恒化连续培养，又叫恒组成连续培养连续培养A.恒浊培养系统；B.恒化培养系统1.盛无菌培养基的容器；2.控制流速阀；3.培养室；4.排出管；5.光源；6.光电池恒化培养与恒浊培养的比较装置