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《免疫学基础及实验技术》

实验报告

姓名：姚丽君

专业：针灸推拿学

年级：2023年研究生

实验室：免疫实验室

间：2023年1月12日

教师：李永念老师

免疫学教研室

人血清I的提取及鉴定

(一)重要原理：

二.离子互换层析提取人血清【gG：离子互换剂采用DEAE-纤维素，是表面交联有二乙基

乙胺基团的纤维素，自身带有真电荷，能吸附阴离子。DEAE-纤维素悬浮在PH高于6.5,

克分子浓度低的缓冲液内，置备成层析柱。人血清通过PH7.4磷酸缓冲液透析平衡后,

其中的IgG不带电荷或仅带少量电荷，其他的蛋白质则重要带负电荷，这样的血清样品

通过相同缓冲液平衡好的DEAE-纤维素柱，除IgG以外的血清蛋白都吸附在柱上，仅

IgG最易形成吸附-解离-再吸附-再解离的状态，因比能随洗脱液一起最早从柱中流出,

收集洗脱液获得IgGc

三.血清I鉴定：以收集的洗脱液为抗原，与兔抗人IgG做琼脂双扩散实验，可根据沉淀线

的形成拟定IgG抗原性。用免疫电泳法使血清中各种蛋白的分子大小以及电荷状态、

电荷量均有差异，因而它们的泳动速率也不相同，根据在凹槽中加入免抗人血清，上下

两孔加入用蔗糖包埋法进行浓缩后的浓缩液和正常人血清，经一段间后出现沉淀弧,

根据沉淀弧的情况来检测所获的IgG的纯度。用754型分光光度计于280nm紫外光源

测定洗脱液光密度值.根据IgG的Elcml%=14.3(OD)公式，可计算出收获的IgG含量,

并推算出所获得IgG的百分率。

1.重要材料：

2.0.5NNaOH、0.5NHL、0.85%NaL按常规配制

3.DEAE-纤维素健康人全血

4.PH7.40.01M磷酸缓冲液

5.20%三氯醋酸水溶液按W/V比例配制

6.蔗糖（研成细粉状）

7.PH8.60025MBA巴比妥纳-巴比妥缓冲液,2MNaL水溶液

8.1.5%琼脂凝胶

布氏斗、抽滤瓶、水泵、试管，烧杯，玻璃棒，滤纸试纸、蝴蝶铁架、透析袋、离心机,746・

电泳仪、754型分光光度计

三、操作环节：

1、（-）DEAE-纤维素预解决：

2、称取DEAE-纤维素12克，均匀撒在事先盛有150ml0.5NNaOH的烧杯中，人其

自由沉降，放置4U—50分钟，不时地用玻璃棒轻轻搅动。

3、将湖状物移入垫有滤纸的布氏斗中，连接斗抽滤瓶，并用水泵抽干糊状物。

立即将DEA6纤维素移入烧杯中，加蒸储水，浸泡20-30min并不时搅拌，再移

入斗抽干，如此反复，至洗出的PH值等于8即可。

（二）将互换剂移入150ml0.5NHL中放置40-50min,不时轻轻搅动.移入布氏斗抽

滤，再依同法用0.5NNaOH解决一次，时间不超过50min。

三（）重第2项操作，至抽灌液PH值等于8即可，最后PH7.40.01MPB液浸泡互换剂,