猪戊型肝炎病毒表位筛选及间接ELISA方法构建与应用研究.docxVIP

猪戊型肝炎病毒表位筛选及间接ELISA方法构建与应用研究

一、引言

1.1研究背景

戊型肝炎病毒（HepatitisEvirus，HEV）是引发戊型肝炎的病原体，这是一种主要经粪-口途径传播的急性病毒性肝炎。戊型肝炎在全球范围内广泛分布，其流行形式包括水源污染引发的大规模暴发以及散发的病例。在亚洲、非洲、美洲等发展中国家，因卫生条件和基础设施相对薄弱，水源污染事件时有发生，导致戊型肝炎呈现大规模流行的态势。而在欧美等发达国家，虽然卫生条件相对较好，但散发病例也时有出现。据世界卫生组织（WHO）估计，全球每年约有2000万人感染HEV，其中330万人会出现症状，戊型肝炎已然成为全球关注的重要公共卫生问题。

HEV不仅感染人类，还能感染多种动物，如猪、野猪、鸡、鸟、鼠、猫及鹿等，是人畜共患的病原体。1997年，猪戊型肝炎病毒（SwineHepatitisEvirus，SHEV）被首次发现，自此猪作为HEV的重要宿主，在病毒的传播和维持感染循环中扮演着关键角色。猪感染SHEV后，虽大多不表现出明显的肝炎临床症状，但病毒对肝脏功能的损害会对猪的生长性能、繁殖性能等生产指标产生负面影响，进而给养猪业造成经济损失。仔猪感染后可能出现生长迟缓，育肥猪的饲料转化率降低，母猪感染后可能导致繁殖障碍，如流产、死胎等情况的发生。

流行病学调查显示，猪群中SHEV的感染率普遍较高。在我国部分地区，猪群的SHEV抗体阳性率可达50%以上，甚至在一些地区高达70%-80%。在广东省的调查中，从25家养猪场采集的1568份血清样本中，有24家（96%）养猪场均检测到HEVIgG抗体，57.53%的血清样本呈阳性。猪群中SHEV的感染具有一定的规律，通常仔猪在断奶后，随着月龄的增加，血清阳性率逐渐上升。猪场的管控水平对感染率也有显著影响，管控水平越高，抗体阳性率越低，如SPF猪场能够有效杜绝HEV感染。

SHEV的传播途径主要为粪-口途径，感染SHEV的猪通过粪便排出大量病毒，污染水源、饲料和养殖环境，进而感染其他猪只。此外，SHEV还可通过猪肉、内脏等食品传播给人类，与猪密切接触的职业人群，如养猪场工人、兽医等，也存在较高的感染风险。研究表明，食用未煮熟的受污染猪肉或内脏，是人类感染SHEV的重要途径之一。在一些地区，因食用生猪肉或未熟透的猪肉制品，导致了人类戊型肝炎的散发病例。

不同基因型的SHEV在致病性和传播特性上存在差异。目前已知HEV可分为4个主要基因型，其中基因1型和2型主要感染人类，引发大规模的人类戊型肝炎流行；基因3型和4型则是人畜共患基因型，可在猪和人类之间传播，导致散发性病例。在我国，猪群中主要流行的是基因4型SHEV，部分地区也有基因3型SHEV的报道，且存在同一猪场同时出现两种基因型SHEV感染的情况。不同基因型的SHEV在核苷酸和氨基酸水平上存在一定的差异，这些差异可能影响病毒的免疫原性、致病性以及诊断和检测方法的准确性。

准确检测SHEV对于猪群健康管理和公共卫生安全至关重要。传统的检测方法如病毒分离培养，操作复杂、耗时较长，且需要专业的实验室条件和技术人员，难以满足大规模检测的需求。血清学检测方法如酶联免疫吸附试验（ELISA），具有操作简便、快速、灵敏等优点，可用于大规模血清样本的筛查，但目前市售的ELISA试剂盒存在特异性和敏感性不足的问题。分子生物学检测方法如逆转录聚合酶链反应（RT-PCR），虽然灵敏度高，但对实验条件和操作人员的要求较高，且容易出现假阳性和假阴性结果。因此，开发一种准确、快速、灵敏的SHEV检测方法具有重要的现实意义。

筛选SHEV的抗原表位是建立高特异性和高灵敏度检测方法的关键。抗原表位是抗原分子中能够被免疫系统识别的特定区域，通过筛选和鉴定SHEV的优势抗原表位，可以制备出具有更高亲和力和特异性的抗体，从而提高检测方法的准确性。同时，针对特定抗原表位建立的检测方法，还可以用于区分不同基因型的SHEV，为病毒的流行病学研究和防控提供有力的技术支持。

综上所述，猪戊型肝炎病毒对猪群健康和公共卫生构成了严重威胁，筛选SHEV的抗原表位并建立高效的间接ELISA检测方法，对于猪群SHEV感染的早期诊断、疫情监测、防控措施的制定以及保障人类健康具有重要的理论和实践意义。

1.2国内外研究现状

自1997年猪戊型肝炎病毒被首次发现以来，国内外学者针对SHEV开展了广泛而深入的研究，涵盖了病毒的基因结构、流行病学、诊断方法以及防控策略等多个领域。

在SHEV表位筛选方面，国内外均取得了一定成果。国外研究人员