基孔肯雅热实验室监测与检测要求.pptxVIP

基孔肯雅热实验室监测与检测要求

2014概述03基孔肯雅热（Chikungunyafever）是由伊蚊叮咬传播的、以发热、皮疹及剧烈关节疼痛为主要特征的病毒性疾病，主要流行于东南亚和非洲地区。该病临床症状与登革热类似，容易误诊。虽然病死率很低，但在蚊媒密度较高地区易形成大规模暴发和流行。近期在我国广东地区大面积流行。

2014病原学特点03基孔肯雅病毒（ChikungunyaVirus，CHIKV）属于披膜病毒科甲病毒属，病毒直径约70nm，有包膜，含有3个结构蛋白（衣壳蛋白C、包膜蛋白E1和E2）和4个非结构蛋白（nsP1、nsP2、nsP3和nsP4）。CHIKV的基因组为不分节段的正链RNA，长度约为11-12kb。病毒基因组编码顺序为5’－NS1－NS2－NS3－NS4－C－E3－E2－E1－3’。通过病毒部分E1基因的系统发生分析可将基孔肯雅病毒可分为3个组；第1组包含了全部西非的分离株，第2组是亚洲分离株，东、中、南部非洲的分离株构成了第3组。CHIKV可在Vero、C6/36、BHK-21和HeLa等细胞中繁殖并产生病变，并可感染除人外的灵长类、乳鼠等动物。

病毒特性不耐酸、不耐热灭活温度58℃以上可灭活病毒消毒剂选择70%乙醇、1%次氯酸钠、脂溶剂、过氧乙酸等紫外照射病毒耐受性与消毒有效杀灭病毒的方法之一

2014标本的类型03（一）血清。急性期血清：无菌采集静脉血2～5ml（非抗凝血），一般情况下，发病后2日内血清可用于病毒分离，发病后5日内血清可用于CHIKV核酸检测和血清学检测。恢复期血清：静脉血2～5ml（非抗凝血），无菌采集，与急性期血清间隔时间为2～3周。采血后，低温保存并尽快运送至实验室分离血清，以便及时进行血清学或病原学检测。不能及时检测的血清可置于-70℃保存，尽量避免反复冻融。

2014标本的类型03（二）伊蚊。在本病暴发或流行期间，采集家庭内或外环境中伊蚊成蚊、幼虫，用于病原学检测。

2014标本采集工作要求031.基孔肯雅热临床诊断病例及疑似病例，每次采集非抗凝血标本5mL，及时分离血清，分装2份，保存于带螺旋管、内有垫圈的冻存管内，标记清楚后低温保存（-80℃）。1份用于现场实验室检测，1份用于上送复核。2.基孔肯雅热疫点首发病例必要时应采集恢复期血清。

2014标本的保存及运送03遵守《病原微生物实验室生物安全管理条例》和《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》1、专人负责保存及运送标本。按照卫生部《人间传染的病原微生物目录》的规定，CHIKV的危害程度属第二类病原微生物，血清和伊蚊标本应采用A类包装。2、病人标本和蚊虫标本需尽快运送至上级单位，应采用冷藏装置（蚊虫标本建议使用液氮运送）并在24小时内运达。避免反复冻融。若不能及时上送，保存在≤-70℃冰箱。3、标本至实验室后，应尽快进行检测，若未能则标本需冷冻（≤-70℃或液氮）保存。血液标本可-20℃以下保存，但不超过1周

实验室级别要求病毒分离需在BSL-3级实验室进行，而血清、伊蚊冻存标本的检测可在BSL-2级实验室完成。检测目的确保准确诊断基孔肯雅热，为防控和治疗提供有力支持。安全规定操作需遵循卫生部《人间传染的病原微生物名录》的相关规定。检测方法基孔肯雅热的实验室检测包括病毒分离、核酸检测和血清学检测三种方法。实验室检测

包括MacELISA、间接ELISA和胶体金标记免疫层析试纸条等。IgM抗体发病后1天出现，5天后多呈阳性，表明新近CHIKV感染，用于早期诊断。IgM检测法恢复期血清IgG抗体滴度比急性期升高4倍或以上，可确诊CHIKV感染。确诊依据常用间接ELISA法、免疫荧光法和胶体金标记试纸条等。IgG抗体发病后2天出现，5天后多呈阳性，表明曾受CHIKV感染。IgG检测法通过特异性IgM和IgG检测，可辅助基孔肯雅热的早期诊断和确诊。检测意义血清学检测方2014病原学检测方法031.CHIKV核酸检测可采用RT-PCR和Real-timePCR等核酸扩增的方法检测。一般发病后4日内在多数患者的血清中可检测到病毒核酸。冻存伊蚊标本也可进行CHIKV核酸检测。2.病毒分离采用Vero、C6/36、BHK-21和HeLa等细胞或其他敏感细胞进行。一般情况下，用于病毒分离的血清标本应在发病2日内采集。冻存伊蚊标本也可进行CHIKV分离。

2014病原学检测方法033．意义患者血清中分离到CHIKV和/或排除PCR污染后，扩增到特异性条带、测序后可确诊CHIKV感染。

2014各级实验室样本检测流程03市级疾控中心或者县区级疾控中心负责对其辖区内的疑似病例标本进行检测。市级疾控中心将辖区内首发病例的阳性标本上送省疾控中心复核,其它检出的阳性病例标本均上送省疾控中