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免疫荧光技术检（测抗核抗体A（NA）的实验方案）

荧光免疫技术是以荧光物质标记的特异性抗体或抗原作为标准试剂，用于相应

抗原或抗体的分析定和定量测定。荧光免疫技术包括荧光抗体染色技术和荧光免疫测定

两大类。荧光抗体染色技术是用荧光抗体对细胞、组织切片或其他标本中的抗原或抗体进

行定和定位检测，可在荧光显微镜下直接观察结果，称为荧光免疫显微技术，或是应

用流式细胞仪进行自动分析检测，称为流式荧光免疫技术。荧光免疫测定主要有时间分辨

荧光免疫测定和荧光偏振免疫测定等。本次实验以荧光免疫显微技术检测抗核抗体（ANA）

为例进行实习。

抗核抗体（antinuclearantibody,ANA）又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的

各种成分脱氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗原（ENA）和RNA等作为靶抗原的自身抗体

的总称，能与所有动物的细胞核发生反应，主要存在于血清中，也可存在于胸水［关节滑膜

液和尿液中。rjoAFNroE8tgBnxo

抗核抗体实验原理

以小鼠肝细胞或某些培养细胞如（Hep-）作抗原片，将病人血清加到抗原片上。如

果血清中含有ANA,就会与细胞核成分特异性结合。加入荧光素标记的抗人IgG抗体又可

与ANA结合，在荧光显微镜下可见细胞核部位呈现荧光。任BKTYS。QNoGoQu

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试剂与器材

1.抗原片现多用商品试剂。如需自行制备，方法如下：

(1)肝印片制备：取4-8周龄小鼠，断颈杀死后，剖腹取肝。将肝脏剪成平面块，用

生理盐水洗去血细胞，用滤纸吸干渗出的浆液。将切面轻压于载玻片上，使其在载玻片上

留下薄层肝细胞。冷风吹干，乙醇固定，冰箱可保存1周。z0c962D8htV8A

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(2)Hep-2细胞抗原片制备：Hep-2细胞是建株的人喉癌上皮细胞。经适宜培养在载玻

片上形成单层细胞抗原片，用洗涤洗去培养基。干燥后,用无水乙醇固定。rOiropAo

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(3)肝切片制备：取小鼠肝组织作冰冻切片，厚4U1。-30℃保存备用。

2.异硫氮酸荧光素(FITC)标记的抗人IgG抗体(FITC-抗人IgG抗体)有商品供应，

临用时按效价稀释。TeDblBjoKyR2J5Go

3.0.01mol/LpH7.2PBS

4.缓冲甘油取甘油9份加PBS1份。

5.待测血清、阳性和阴性对照血清临床标本筛选获得。

6.器材荧光显微镜、孵箱、有盖湿盒、染色缸、吸管、试管等

操作方法

1.准备：检查加样板，生物载片恢复室温，标记。

2.释：PBS-Tween缓冲液释血清，设阴阳性对照。

3.加样：加样板放于泡沫塑料板上，加25Hl释后血清，至加样板的每一反应

区，避免气泡。加完所有标本后开始温育。Ke2fCtXxhzfohw

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4.温育：将生物薄片盖于加样板的凹槽里，反应开始，室温温育30分钟。

5.冲洗：用烧杯盛PBS-Tween缓冲液流水冲洗生物薄片，然后立即将其浸入盛有

PBS-Tween缓冲液的小杯中至少1分钟。不必混摇。g9cN0qi5K7UI85

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6.加样：滴加20Hl荧光素标记的抗人球蛋白（结合物）至一洁净加样板的反应

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