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2025/07/12
蛋白质免疫印迹(WesternBlot)实验
汇报人：_1751851681
CONTENTS
目录
01
WesternBlot实验原理
02
WesternBlot实验步骤
03
WesternBlot实验注意事项
WesternBlot实验原理
01
基本原理介绍
蛋白质的电泳分离
WesternBlot实验中，首先利用SDS对蛋白质进行电泳分离，根据分子量大小进行排序。
抗体特异性结合
分离后的蛋白质转移到膜上，通过特定抗体与目标蛋白的特异性结合，实现检测和识别。
关键步骤解析
样品制备
将细胞或组织样本裂解，提取总蛋白，为后续电泳做准备。
电泳分离
通过SDS电泳，根据蛋白质分子量大小将样品中的蛋白分离。
转膜过程
将分离后的蛋白条带转移到PVDF或NC膜上，为后续的免疫反应做准备。
WesternBlot实验步骤
02
样品制备
细胞裂解
细胞裂解是WesternBlot实验的第一步，通过使用裂解液破坏细胞膜，释放出细胞内的蛋白质。
蛋白定量
蛋白定量用于测定样品中总蛋白的浓度，确保后续实验中每个样品的加样量一致。
电泳分离
样品制备
将蛋白质样品与上样缓冲液混合，加热变性后准备上样。
凝胶电泳
将样品加入凝胶孔中，通过电场作用使蛋白质按大小分离。
染色与脱色
电泳后，使用染色剂对凝胶进行染色，再通过脱色液去除背景，显现分离的蛋白质条带。
转膜过程
准备转膜缓冲液
转膜前需配制特定的转膜缓冲液，以确保蛋白质从凝胶有效转移到膜上。
选择合适的转膜膜
根据目标蛋白的大小和性质选择PVDF或硝酸纤维素膜，以提高转膜效率和特异性。
设置转膜装置
将凝胶、膜和滤纸按照正确的顺序放置在转膜装置中，确保无气泡，以防止转膜失败。
控制转膜时间和电压
根据蛋白分子量大小选择适宜的转膜时间与电压，以保证蛋白质的完整性和转膜效果。
封闭与抗体孵育
样品制备
将蛋白质样品与上样缓冲液混合，加热变性后准备上样。
凝胶电泳
将样品加入凝胶孔中，通过电场作用使蛋白质按大小分离。
染色与脱色
电泳后，使用染色剂对凝胶进行染色，再通过脱色步骤观察分离的蛋白质条带。
显色与检测
细胞裂解
细胞裂解是WesternBlot实验的第一步，通过使用裂解液破坏细胞膜，释放出细胞内的蛋白质。
蛋白定量
蛋白定量用于测定样品中总蛋白的浓度，确保后续实验中每个样品的加样量一致。
WesternBlot实验注意事项
03
实验前准备
蛋白质样品的制备
通过裂解细胞或组织，提取总蛋白，为后续电泳分离做准备。
凝胶电泳分离
利用SDS凝胶电泳技术，根据蛋白质分子量大小进行分离。
目标蛋白的检测
通过抗体结合和显色反应，特异性地检测目标蛋白条带。
实验操作细节
蛋白质分离
利用SDS凝胶电泳技术，根据蛋白质分子量大小进行分离。
抗原抗体特异性结合
通过抗体识别并结合特定的蛋白质抗原，实现目标蛋白的检测。
结果分析要点
细胞裂解
在WesternBlot实验中，细胞裂解是提取蛋白质的第一步，通常使用含有蛋白酶抑制剂的裂解液。
蛋白定量
样品制备的另一关键步骤是蛋白定量，确保后续实验中每个样品的蛋白含量一致。
THEEND
谢谢
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