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尘螨变应原特异重组人单抗IgGFab片段的制备与活性探究：从基础到应用

一、引言

1.1研究背景

在全球范围内，变态反应性疾病，尤其是哮喘，已然成为危害严重的全球性公共卫生问题。在大多数国家，哮喘的发病率及死亡率呈现出持续上升的趋势。尘螨变应原是引发变态反应性疾病的重要病因之一，特别是儿童变应性哮喘的关键危险因子。

尘螨是一种常见的过敏原，尘螨过敏病在世界上较为普遍。其主要表现为鼻子、眼睛、皮肤等症状，如过敏性鼻炎、过敏性皮炎、哮喘等。尘螨广泛存在于人类居住环境中，如卧室的床褥、枕头、地毯和沙发，以及不常洗的衣服中。它们的食物主要为粉末性物质，如人类皮屑、面粉、奶粉，也会吞食植物花粉、霉菌孢子及植物纤维。尘螨呈全球性分布，除了海拔2000米以上的高寒地带，各地均有踪迹，尤其适宜在温暖潮湿的地带生长，像我国华东华南沿海沿江地区。在温带地区，春秋两季是尘螨种群的密度高峰期，且秋季密度高于春季，而在空调房间中，尘螨可全年繁殖。

尘螨变应原是尘螨体内产生的一种抗原物质，对于尘螨过敏的产生和发展起着重要作用。尘螨的变应原包括螨体、螨粪、螨足及其口器等部分，其中螨体和螨粪是最常见的过敏原。螨体的主要组成部分是蛋白质，70-90%的蛋白质可引发过敏反应；螨粪中含有的过敏原铁蛋白、螨胆原、螨酪蛋白等，同样能引起过敏反应。尘螨变应原主要存在于螨体及其代谢产物中，其组成成分相当复杂，约有30余种蛋白成分可诱导尘螨过敏患者产生IgE抗体，进而引发螨性哮喘、过敏性鼻炎、螨性皮炎等变态反应性疾病。在我国，临床上尘螨占所有过敏性疾病患者皮试阳性率的首位，达到70%-80%，特应性皮炎患者尘螨浸液皮肤点刺试验阳性率高达72%。

尘螨过敏不仅会导致呼吸道症状，如打喷嚏、流鼻涕、咳嗽、气喘，严重时诱发哮喘发作，且在夜间或清晨症状可能加重，影响正常呼吸功能；还会引发皮肤症状，如红斑、瘙痒，常见的过敏性皮炎会使患者不自觉搔抓皮肤，导致皮肤破损，进而引发感染，且症状可能反复出现，影响皮肤健康和外观形象；眼睛接触尘螨过敏原后，会出现眼痒、眼红、流泪等症状，过敏性结膜炎较为常见，不仅影响视力，还干扰正常生活和工作。此外，尘螨过敏还会加重原有疾病，如哮喘患者接触尘螨后发作频率增加、症状加重，过敏性鼻炎患者的鼻塞、流涕等症状更难控制，治疗难度加大，病程延长，对患者身体健康造成更大威胁，全方位降低患者的生活质量。

变应性疾病的病因复杂，除了复合多基因式遗传外，出生前后与环境变应原的接触也至关重要。鉴于此，WHO提出儿童变应性疾病的三级预防理论，并呼吁将一级预防作为今后研究的重点。多项研究表明，孕期母体高水平的变应原特异IgG抗体对胎儿今后发生变应性疾病具有抑制作用。因此，制备尘螨变应原特异的抗体用于螨性变应性疾病的防治研究具有重要意义。

近年来，随着生物技术的不断发展，人工合成抗体的技术也取得了显著进步，重组人单抗IgGFab片段的制备成为研究尘螨变应原和探索治疗方法的重要手段。重组人单抗IgGFab片段是将人源鼠嵌合抗体（人源化单抗）的抗原识别变量区（Fab区域）和人IgG的Fc区域分离进行重组的产物。这种片段具有高度的抗原特异性，能够有效地结合和中和目标抗原，同时避免了整个抗体的免疫原性可能带来的副作用，在生物医学研究和临床实践中展现出广泛的应用前景。故而，本课题致力于制备尘螨变应原特异的重组人单抗IgGFab片段，并对其生物学活性展开研究，期望为尘螨过敏的防治提供新的理论和实践基础。

1.2研究目的与意义

尘螨过敏已然成为全球性的健康问题，给众多患者的生活质量带来了严重影响，也对社会医疗资源造成了沉重负担。本研究聚焦于尘螨变应原特异的重组人单抗IgGFab片段的制备及生物学活性研究，旨在通过深入探索，为尘螨过敏的防治开辟新的路径，为抗体研究领域注入新的活力。

本研究的首要目标是成功制备尘螨变应原特异的重组人单抗IgGFab片段。通过对尘螨变应原氨基酸序列的精准分析，巧妙设计引物，从人体免疫细胞库中高效扩增出重组人单抗IgGFab片段的DNA序列，并将其成功克隆进表达载体，利用大肠杆菌等细胞实现高效表达。在制备过程中，采用亲和层析、离子交换层析等多种先进技术对表达的重组蛋白进行精细纯化，运用SDS和Westernblot等方法进行严格的纯度检测，以确保获得高纯度、高质量的重组人单抗IgGFab片段。

在成功制备该片段的基础上，对其生物学活性展开全面且深入的研究。利用酶联免疫吸附试验（ELISA）、细胞介导的免疫治疗（IMM）、表面等离子共振BIAcore检测、肥大细胞脱颗粒抑制试验等多种技术手段，对重组人单抗IgGFab片段的抗原特异性、亲和力、竞争