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构建超大规模天然噬菌体纳米抗体库

目录

一、文档综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1.1噬菌体展示技术概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.1.2纳米抗体应用前景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

1.1.3超大规模噬菌体纳米抗体库的潜在价值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

1.2国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

1.2.1噬菌体展示文库构建技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

1.2.2纳米抗体开发进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

1.2.3超大规模噬菌体抗体库相关研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

1.3研究目标与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

1.3.1主要研究目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

1.3.2具体研究内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

1.4技术路线与创新点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

1.4.1技术路线图．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

1.4.2本研究的创新之处．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

二、超大规模噬菌体纳米抗体库构建方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

2.1噬菌体展示系统选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

2.1.1噬菌体菌株特性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

2.1.2展示蛋白选择与改造．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

2.2纳米抗体分子设计与制备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

2.2.1纳米抗体结构域选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

2.2.2纳米抗体基因构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

2.2.3纳米抗体表达与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

2.3超大规模噬菌体文库构建策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

2.3.1文库容量设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

2.3.2基因组装技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

2.3.3噬菌体文库扩增与验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

2.4表达盒构建与噬菌体展示．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

2.4.1表达盒设计原则．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

2.4.2噬菌体展示载体构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46

2.4.3噬菌体展示库转化与扩增．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48

三、超大规模噬菌体纳米抗体库的筛选与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．49

3.1筛选靶标选择与制备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50

3.1.1靶标蛋白选择依据．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51

3.1.2靶标蛋白表达与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52

3.2筛选方法建立．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．56

3.2.1筛选模式选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．57

3.2.2筛选条件优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．59

3.3筛选过程