DB15T 4109-2025 番茄病毒RT-PCR检测技术规程.docxVIP

ICS65.020.01CCS

ICS

65.020.01

CCS

B04

内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准

DB15/T4109—2025

番茄病毒RT-PCR检测技术规程

CodeofpracticeforRT-PCRdetectionoftomatoviruses

2025-07-10发布 2025-08-10实施

内蒙古自治区市场监督管理局 发布

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DB15/T4109—2025

前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。

本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（SAM/TC25）归口。

本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古中天现代农牧业开发有限责任公司、鄂尔多斯市农牧技术推广中心。

本文件主要起草人：张磊、李正男、孙平平、刘燕、王永、杨永青、高婧、廉勇、付崇毅、赵沁、徐文俊、韩静宇、张静春、徐磊、张佳。

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番茄病毒RT-PCR检测技术规程

范围

本文件规定了番茄病毒检测中的术语和定义、检测对象、抽样、取样、检测方法和判定规则等内容。本文件适用于番茄病毒的检测。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T34265 Sanger法测序技术指南

GB/T40974 核酸样本质量评价方法

SN/T2497.21 进出口危险化学品安全试验方法第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

RNA病毒 RNAviruses

核糖核酸病毒，其遗传物质为RNA。

DNA病毒 DNAviruses

脱氧核糖核酸病毒，其遗传物质为DNA。

反转录 Reversereversetranscription（RT）

以RNA为模板，逆转录酶催化合成DNA的过程。

互补DNA complementaryDNA（cDNA）

由逆转录酶催化合成的、与RNA模板互补的DNA。

聚合酶链式反应 polymerasechainreaction（PCR）

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利用DNA聚合酶，对DNA或cDNA模板的特定区域进行体外扩增的技术。反应混合物通常由DNA聚合酶、脱氧核苷三磷酸、引物和缓冲液组成，反应过程主要包括变性、退火和延伸三个步骤。

引物 primers

人工合成的具有一定长度的单链DNA分子，与DNA模板链的特定区域互补，其3’末端在PCR过程中作为复制延伸的起始位点。

检测对象

主要RNA病毒种类

苜蓿花叶病毒（Alfalfamosaicvirus，AMV）。黄瓜花叶病毒（Cucumbermosaicvirus，CMV）。南方番茄病毒（Southerntomatovirus，STV）。

番茄斑驳花叶病毒（Tomatomottlemosaicvirus，ToMMV）。番茄花叶病毒（Tomatomosaicvirus，ToMV）。

番茄斑萎病毒（Tomatospottedwiltvirus，TSWV）。

主要DNA病毒种类

番茄黄化曲叶病毒（Tomatoyellowleafcurlvirus，TYLCV）。

抽样方法

采用5点法抽样。

种植面积在2001m2以内（含2001m2），抽检100株。种植面积在2001m2到20010m2之间（含

20010m2），前2001m2抽100株，之后每增2001m2增检50株。种植面积超过20010m2时，前20010

m2按上述方法抽样，之后每增加2001m2增检20株。

取样方法

对样方内的番茄进行采样，取靠近顶部的新鲜叶或枝条，掸掉灰尘或其他附着物，除去蚜虫，放置于自封采样袋内。

采样点距离检测点较远时，用湿纸巾、海绵或布条包裹叶或枝条的切割处，置于采样自封袋内进行运输。

样品在检测点存储时间较短时（一般不超过24h），在4℃存放即可。长期存放样品时，需要将样品用液氮预冷后，保存于-80℃超低温保存箱。

检测方法

样品前处理

避开叶片中脉，切取叶片组织用于检测。

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样品核酸提取

选择市售的用于提取含有多糖多酚材料的RNA或DNA的试剂盒，按照试剂盒自带的说明书