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D-二聚体检测
的临床应用
D-二聚体(D-Dimer)概念D-二聚体(D-Dimer)是交联纤维蛋白(Fb)在纤溶酶的作用下水解产生的特异性降解产物,其水平的升高反映高凝状态和继发纤溶亢进,D-二聚体可以作为体内高凝状态和纤溶亢进的标志性物质
人体纤溶系统,它对保持血管壁的正常通透性,维持血液的流动状态和组织修复起着重要作用。正常状态下,凝血与纤溶系统保持动态平衡壹贰
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D-二聚体的产生Page?6当纤维蛋白凝结块形成时,在tPA(组织纤溶酶原激活物)的存在下,纤溶酶原激活转化为纤溶酶,纤维蛋白溶解过程开始,纤溶酶降解纤维蛋白凝结块形成各种可溶片段,形成纤维蛋白降解产物(FDP),FDP由下列物质:X-寡聚体、D-二聚体、中间片段、片段E组成。
凝血系统的激活导致凝血酶生成,凝血酶结合于纤维蛋白原的中央结构域,释放纤维蛋白肽A(FPA)和纤维蛋白肽B(FPB),生成纤维蛋白单体和多聚体。在活化FXIII的作用下,生成交联的纤维蛋白。纤溶酶降解交联纤维蛋白,生成多种交联的纤维蛋白降解产物(FbDPs),其中包括D-D和其它的片段
D-二聚体测定Page?8测定方法:有胶乳凝集法、ELISA、免疫渗滤法、免疫比浊法等,唯有免疫比浊法敏感性高、定量、快速、简便。全自动血凝仪利用散射光免疫比浊法定量测定D-二聚体,D-二聚体是交联纤维蛋白的降解产物之一,继发性纤溶的特有代谢物。目前有超过30种检测方法在使用
(1)免疫比浊法原理Page?9当混合标本中含有D-二聚体时,聚苯乙烯颗粒包被到单克隆抗体,与交联纤维蛋白降解产物(D-二聚体)的交联区域结合。单克隆抗体能触发凝集反应,随后检测浊度的增加。仪器在800nm处通过对浊度改变的监测,将吸光度转换成浓度值,由此获得样本中D-二聚体的量。(2)检测设备SysmexCA1500全自动血凝分析仪
(3)配套试剂西门子公司INNOVANCED-Dimer试剂D-Dimer试剂D-Dimer缓冲液D-Dimer补充试剂D-Dimer样本稀释液用4ml蒸馏水溶解,在室温下(15~25)℃放置约15分钟
参考区间0~0.55mg/L可报告范围(0.1~43.2)mg/L定标范围(0.16~10.14)mg/L如上图定标曲线所示,定标范围(0.16~10.14)mg/L,若D-Dimer值超过10.14mg/L需要选择仪器自带的1/8稀释进行检测。
若1/8稀释结果依然测不出,则需要进行手工稀释,稀释液用D-Dimer配套试剂中白盖样本稀释液。仪器出现RangeOver报警信息需进行1/8稀释
采血时,一般要在病人空腹、安静状态下进行,以早晨07:00至09:00最为适宜,因为生物钟时间对检测指标有一定的影响。t-PA和PAI-1有较大的昼夜变化,对于多次反复采血的病人最好在同一固定时间和同一条件下采血。采血时尽量不用止血带束扎或扎带压力要小,束缚时间要小于5min,压力大和束缚时间长会激活凝血机制,使凝血因子活性增高,内皮细胞释放t-PA,激活纤溶系统而引起纤溶活性增强,造成假阳性结果。采血人员应技术熟练,一针见血,防止组织过多损伤,纤维蛋白肽A在稍有组织损伤时,可导致结果改变。标本必须立即送检及时检查,时间过久引起血浆中凝血因子被活化且有纤溶酶被激活,从而导致交联纤维蛋白的形成并随之发生降解,使D-二聚体产生过多D-二聚体检测的注意事项
静脉采血需用含0.109mol/L枸橼酸钠抗凝管采集,枸橼酸钠与血液标本比例为1:9,抗凝剂的量要准确。如抗凝剂量减少会使D-二聚体值偏高,抗凝剂量增多会使D-二聚体值偏低,失去检测的准确性。抗凝剂:草酸盐、EDTA、肝素不适用于凝血检查。标本采集处理不当,如血与抗凝剂未充分混匀,出现凝块,混匀时过分用力,使标本溶血,造成结果异常。纤溶药物的影响,如双香豆素、链激酶、尿酶等。某些药物,如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等影响测试结果D-二聚体检测的注意事项
影响D-二聚体的因素
文献报道各类疾病D-D升高的阳性率
不同类型手术后D-二聚体的变化正常情况下,D-二聚体在达到峰值水平后通常是以6%/d的速度清除,因此通过观察D-二聚体的变化趋势评估手术后的血栓风险。手术持续时间、术前D-二聚体水平影响术后水平。根据各实验室不同的检测系统确定医学决定水平。
住院病人D-二聚体阳性率较高是不争的事实,不应过多纠结。而应专注于为什么会升高?增高多少需要临床干预(抗凝治疗);应结合病人人群建立D-二聚体检测的医学决定水平(反映某一病种患者罹患血栓的风险程度);排除VTE和PE的CUTOFF值(0.5mg/LFEU,已获美国FDA的认证)接近正常人参
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