生物化学核酸.pptVIP

琼脂糖凝胶制胶一般将EB直接加入而聚丙烯酰胺凝胶制胶时不能将染料加入，会影响聚合。1000bp第62页，共90页，星期日，2025年，2月5日第63页，共90页，星期日，2025年，2月5日第64页，共90页，星期日，2025年，2月5日第五节核酸的研究方法一核酸的分离、提纯和定量测定二核酸的凝胶电泳三序列测定四化学合成五PCR第65页，共90页，星期日，2025年，2月5日三序列测定1DNA酶法测序2DNA的化学法测序3RNA的测序第66页，共90页，星期日，2025年，2月5日DNA酶法测序Sanger于1975年设计快速测序方法”加减法”第67页，共90页，星期日，2025年，2月5日第68页，共90页，星期日，2025年，2月5日第69页，共90页，星期日，2025年，2月5日第70页，共90页，星期日，2025年，2月5日第71页，共90页，星期日，2025年，2月5日第72页，共90页，星期日，2025年，2月5日第73页，共90页，星期日，2025年，2月5日DNA的复性图示第30页，共90页，星期日，2025年，2月5日2、影响DNA的复性的因素分子量越大复性越难。浓度越大，复性越容易。DNA的复性需要一定的盐浓度，增加盐浓度，复性速度加快第31页，共90页，星期日，2025年，2月5日将热变性的DNA骤然冷却至低温时，DNA不可能复性。即淬火。但是将变性的DNA缓慢冷却时，可以复性，这一过程也叫退火（annealing)退火温度＝Tm－25℃第32页，共90页，星期日，2025年，2月5日（三）、分子杂交热变性的DNA单链，在复性时并不一定与同源DNA互补链形成双螺旋结构，它也可以与在某些区域有互补序列的异源DNA单链形成双螺旋结构。这样形成的新分子称为杂交DNA分子。DNA单链与互补的RNA链之间也可以发生杂交。第33页，共90页，星期日，2025年，2月5日第34页，共90页，星期日，2025年，2月5日第35页，共90页，星期日，2025年，2月5日第36页，共90页，星期日，2025年，2月5日SouthernBlot：DNA-DNA杂交NorthernBlot：DNA-RNA杂交PCR技术核酸的杂交在分子生物学和遗传学的研究中具有重要意义。第37页，共90页，星期日，2025年，2月5日分子杂交的种类SouthernBlot：DNA-DNA杂交NorthernBlot：DNA-RNA杂交WesternBlot：抗原-抗体进行杂交原位杂交：活体组织上进行杂交，显出荧光第38页，共90页，星期日，2025年，2月5日第一节概述第二节核酸的化学组成第三节核酸的分子结构第四节核酸的性质第五节核酸的研究方法第39页，共90页，星期日，2025年，2月5日第五节核酸的研究方法一核酸的分离、提纯和定量测定二核酸的凝胶电泳三序列测定四PCR五化学合成第40页，共90页，星期日，2025年，2月5日第五节核酸的研究方法一核酸的分离、提纯和定量测定(一)核酸的分离、提纯(二)定量测定第41页，共90页，星期日，2025年，2月5日第五节核酸的研究方法一核酸的分离、提纯和定量测定(一)核酸的分离、提纯1、DNA2、RNA第42页，共90页，星期日，2025年，2月5日目前分离DNA方法：盐抽提，用苯酚和氯仿去蛋白SDS/CTAB氯化铯密度梯度离心第43页，共90页，星期日，2025年，2月5日SDS法小量制备植物基因组DNA的原理在含有去污剂，如SDS或CTAB的溶液中，植物细胞会被裂解释放出细胞核中的基因组DNA，通过氯仿/异戊醇的抽提和离心去除掉裂解液中的细胞碎片、蛋白质以及其它杂质，这时的基因组DNA分配在水相中。然后用乙醇(或异丙醇)将水相的DNA分子沉淀出来，最后溶于TE缓冲液或纯水中备用。第44页，共90页，星期日，2025年，2月5日剪取新鲜的植物叶片约20mg，剪碎置于1.5ml离心管中；向离心管中缓慢加入液氮冷冻植物叶片；在液氮蒸发去2/3时，用自制研杵迅速磨碎叶片；立即加入300uL65℃预热的提取液摇匀，于65℃水浴约1hr，其间摇动数次；加等体积氯仿/异戊醇（24:1）混匀，于12000rpm离心5分；转移上清液到另一干净1.5ml离心管中，加入2倍体积预冷的无水乙醇，混匀后静置