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番茄快繁体系技术规程

1范围

本标准规定了番茄快繁脱毒体系的种子预处理、无菌苗诱导、愈伤组织诱导、不定芽诱导、继代增殖、生根培养及炼苗驯化等关键技术流程与操作规范。

本规程适用于宁夏地区设施条件下番茄品种的组织培养快繁与脱毒种苗生产，也可为其它地区番茄品种及茄果类作物的组培繁殖提供技术参考。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB16715.3-2010瓜菜作物种子茄果类

GB/T32741-2016植物离体培养术语与定义

NY/T2236-2012植物组培苗工厂化生产技术规程

NY/T5010-2016无公害农产品种植业产地环境条件

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1番茄快繁体系

以番茄为材料，利用植物组织培养技术，在无菌条件下，通过种子脱毒、愈伤诱导、不定芽诱导、继代增殖、生根培养及炼苗驯化等环节，实现番茄健康种苗高效扩繁的技术体系。该体系具备脱毒彻底、周期短、增殖快、成苗一致性强等特点，适用于设施农业、育种及大规模苗木供应。

3.2愈伤组织诱导

指在适宜的培养基和植物激素条件下，诱导番茄茎尖或胚轴等组织形成愈伤组织，为后续的不定芽诱导及苗木快繁提供基础材料。

3.3不定芽诱导

指通过调控外源激素浓度，使愈伤组织中的潜在细胞重新启动分裂过程，形成具有再生

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能力的不定芽簇，是快繁过程中实现多倍增殖的关键步骤。

3.4继代培养

指在组培过程中，将已形成的不定芽或苗条按一定节段切取后，转接至相同或优化后的培养基中继续生长或繁殖的过程。通过多轮继代操作可实现苗木的指数级扩繁，是快繁体系中提高增殖倍数的关键环节。

3.5炼苗驯化

将组培苗移出无菌环境，逐步适应外界自然条件的过渡过程。包括瓶口开启、去除培养基残留、移栽至基质盆栽和控制温湿光等措施，促进组培苗根系发育与功能恢复，提高田间移栽的成活率和适应性。

4生产场地选择

应选择具备良好水源、地势平坦、通风良好、远离污染源的场地，具有稳定电源和温湿光调控条件的组织培养实验室。组培驯化阶段应配备标准温室或炼苗设施，满足苗木脱瓶、生根缓苗、田间移栽等关键过程的环境控制与管理要求。

5生产技术管理

5.1材料的来源

中国农业科学院蔬菜花卉所

5.2材料及设备

原味一号番茄种子、75%酒精、10%NaClO、MS培养基、洗洁精、各类植物生长调节剂、烧杯、枪状镊、手术剪刀、高压蒸汽灭菌锅、无菌脱脂纱布、解剖镜

5.3消毒培养基的选择

分别使用无菌脱脂纱布、育苗基质以及MS为基本培养基，以10%次氯酸钠为消毒

剂，消毒8-10分钟，探究不同培养基类型和不同消毒时间对番茄种子萌发和生长状况，筛选出最适培养基。

纱布培养基：将无菌脱脂纱布根据培养瓶大小剪下，用消毒过的镊子夹取3层在无菌水中浸湿后，置于瓶子底部并铺平，转移至高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌30分钟后放凉备用。

基质培养基：将消毒过的育苗基质平铺在组培瓶底部，并用无菌水中浸湿，转移至高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌30分钟后放凉备用。

MS培养基：将配置好的MS到于瓶子底部，转移至高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌30分钟后放凉备用。

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5.4种子预处理

挑选当年优良饱满的‘原味一号’番茄种子，将其放入洗洁精溶液中搅拌15分钟后用无菌水清洗5遍，采用温汤浸种浸泡30min。消毒完毕后用消毒过的镊子夹取种子放入灭菌后的烧杯中，注入少量无菌水保湿，放入超净工作台内，以备接种使用。

5.5接种

以上准备完毕后，于紫外灭菌灯灭菌30min的超净工作台中进行操作，将培养瓶、

75%酒精、盛种子的烧杯均用75%酒精消毒后，置于台面，滤纸吸干种子后，75%酒精处理30s，再用无菌水冲洗2～3次，0.1%次氯酸钠溶液灭菌8-10min,无菌水冲洗5～6

次，置于消毒烧杯中，用灭菌的镊子将种子转移至培养瓶中，数量由组培瓶大小决定，种子间距0.5mm以上。每次接种前后瓶口一定要灼烧灭菌。

5.6种子脱毒培养

培养阶段培养室温度控制在25～28℃,每天光照12小时。光照强度3000lux，一般接种后2d时，种子萌发率30%，5d时，萌发率可达90%以上，进而发育成无菌幼苗。

5.7愈伤组织诱导培养

剪取适当高度的无菌幼苗，在解剖镜下剥离出茎尖生长点，置于MS培养基+6