第十一章经典液相色谱法.pptVIP

****************吸附剂和流动相的选择：

依据被测组分、吸附剂和流动相的性质1.被测组分性质（极性大小）：烃＜--------＜羧酸2.吸附剂的活性：吸附剂的活性↑大，对组分的吸附能力↑强，K↑大强极性物质——选择弱吸附剂弱极性物质——选择强吸附剂3.流动相的极性：流动相极性↑大，对组分的展开能力↑大,K↑小“相似相溶”原则：根据组分性质、吸附剂的活性，选择适当极性的流动相第30页，共48页，星期日，2025年，2月5日4.三者关系图示：组分吸附剂流动相极性活性小极性非(弱)极性活性大非极性或弱极性5.展开顺序:固定相、展开剂一定极性越小者Rf越大,展开快极性越大者Rf越小,展开慢6.吸附剂活性越大，Rf展开剂极性越大，Rf第31页，共48页，星期日，2025年，2月5日例.硅胶板分离生物碱，展开剂为：环己烷:丙酮:乙二胺:水=10：5：2：51）环己烷：弱极性，减弱洗脱能力，增大K，减小Rf2）水：强极性，增强洗脱能力，减小K，增大Rf3）丙酮：中等极性，增加极性与弱极性溶剂间的互溶性4）乙二胺：调节pH值，抑制组分离解，减少斑点拖尾。第32页，共48页，星期日，2025年，2月5日（二）薄层色谱操作方法1）薄层板的类型（1）硬板：加粘合剂—湿法铺板（2）软板：无粘合剂—干法铺板1.薄层板的制备2）粘合薄层板（硬板、湿板）的铺制⑴粘合剂煅石膏：吸附剂的9-15%左右—硅胶-G板羧甲基纤维素钠CMC-Na：0.5-1%水溶液—硅胶-CMC板第33页，共48页，星期日，2025年，2月5日3）铺板方法（1）倾注法铺板（2）平铺法铺板（3）机械涂铺法铺板4）活化凉干-活化-放冷-干燥器中注意：活化温度及时间（105℃，1h）活化的目的（除去水分）第34页，共48页，星期日，2025年，2月5日2.点样1）样品溶液避免用水作溶剂，斑点易扩散，溶剂不易挥发一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性溶剂最好用与展开剂极性相似的溶剂2）点样量几到几十微克，点样直径不超过2~3mm间距1.5~2cm端距1~2cm直径:3mm。几~几十微克，少于10μL起始线第35页，共48页，星期日，2025年，2月5日3.展开(1)展开方式:上行展开法、近水平展开双向展开、同向多次展开软板——近水平展开硬板——上行法(2)展开中注意之点a)边缘效应：同一物质在同一薄板上展开时两边的Rf值与中间部分的Rf值不同b)消除边缘效应的措施：展开前充分饱和15~30min展开槽内壁贴上滤纸条浸湿选小体积展开槽第36页，共48页，星期日，2025年，2月5日图示第37页，共48页，星期日，2025年，2月5日4.显色显色方法1、有色化合物——直接定位2、无色显色剂：通用有碘、碘化铋钾、溴甲酚绿、硫酸例：分离酸性物质选酸性硅胶板，使用溴甲酚绿为显色剂紫外吸收紫外灯检出斑点有荧光荧光板上有暗斑显色剂定位喷雾显色蒸气显色：碘-生物碱、氨基酸衍生物、肽类、脂类及皂苷喷雾后加热显色★第38页，共48页，星期日，2025年，2月5日1）Rf定性（三）定性与定量分析1.定性分析⑴组分的结构和性质⑵薄层板的性质⑶展开剂的性质⑷温度（对分配影响大，对吸附影响小）⑸展开室内展开剂蒸气饱和程度影响比移值的因素2）相对比移值Rst定性与对照品Rst比较或与文献Rst比较。第39页，共48页，星期日，2025年，2月5日2.杂质检查1）杂