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农用化工产品品质检验
液相色谱知识点之——
等度洗脱与梯度洗脱
isocraticelutionandgradienteltuion
制作者：徐瑾
定义
1
等度洗脱与梯度洗脱
Anelutionwithasinglesolventorsolventmixtureofconstantcompositionistermedanisocraticelution.Ingradientelution,two(andsometimesmore)solventsystemsthatdiffersignificantlyinpolarityareusedandvariedincompositionduringtheseparation.Theratioofthetwosolventsisvariedinapreprogrammedway,sometimescontinuouslyandsometimesinaseriesofsteps.
在液相色谱中常用的梯度洗脱技术是指流动相梯度，即在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。
等度洗脱
2
选择等度洗脱的原因
等度洗脱在过程中流动相组成不变，操作简单，对仪器要求低，在实验室内颇受欢迎。
实验室不具备梯度洗脱设备。
梯度洗脱更复杂，方法建立比较困难。
有些检测器（如RID）不能使用梯度洗脱。
每次运行梯度洗脱后需重新平衡色谱柱，耗时较长。
不同设备的分离结果可能不同，梯度洗脱的方法在设备间移置时会出现差异。
某些色谱柱/流动相的联合应用不适于梯度洗脱。
梯度洗脱
3
梯度洗脱适用的情况
具有较宽的k（容量因子）值范围的样品
样品中含有晚流出的干扰物，它们会污染色谱柱或在后续运行中流出
溶于弱溶剂的样品稀溶液（如用反相色谱柱分离的样品水溶液），大体积进样峰不会展宽
梯度洗脱的原理
流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，从而使每个流出的组分都有合适的容量因子k，并使样品中的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。
例如：当样品中的一个组分的k值和最后一个组分的k值相差几十倍至几百倍时，如果使用等度洗脱，不但分析时间长，而且色谱峰形状不满意。梯度洗脱改变流动相中强洗脱溶剂的比例，使流动相的极性发生变化，当最后一个组分的k值达到足够小（比如小于10），其在柱中的移动速率明显增大，并且随着强洗脱溶剂的增加，其移动速率愈加快速，直到流出色谱柱，被检测器检测到并被记录成色谱峰。
梯度洗脱
4
Separationofdialkylphthalatehomologs(二羟基钛酸盐同系物，C2-C10）
C8column；Mobilephase:A-waterB-acetonitrile
梯度洗脱的设备
5
高压梯度
利用两台或两台以上高压输液泵，将两种或两种以上不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。
低压梯度
一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵，在混合器中混合。
High-pressuremixingsystems
Low-pressuremixingsystems
高压梯度洗脱
6
配置：双泵+在线混合器（二元高压梯度）
工作方式
双泵并联，可同时两个流动相，按照预先设定的配比进入，在高压下进行混合，混合配比更准确，不易产生气泡，不用为了转换流动相而反复清洗，提高工作效率。
High-pressuremixingcombinessolventsAandBimmediatelyafterthepump(athighpressure).Inhigh-pressure-mixing(HPM)systems,thegradient,onceformed,movesdirectlytotheautosamplerofsamplevalve.
低压梯度洗脱
7
配置：单泵+低压梯度阀+在线脱气机+混合器
工作方式
最多可同时有四个流动相进入流路，按照预先设定的配比进行混合，由于在常压下混合，所以容易产生气泡，因此必须配备在线脱气机，可消除气泡影响。
Low-pressuremixingcombinesthesolventsbeforethepump.Inlow-pressure-mixing(LPM)systems,thegradient,passesthroughthepumpandassociatedmodulesbef
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