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免疫自动化仪器分析医学检验系刘利东

早期免疫分析通过观察沉淀物形成，凝集及溶血现象发生来分析，如免疫扩散、免疫电泳、血凝试验、补体结合等上世纪50年代末60年代初，利用AG-AB复合物形成使浊度改变，再用比浊计来比浊，但因其敏感性差未被接受70年代初，开始有自动检测系统，但因其用的是激光为光源，固定波长，灵敏度较低，而且时间一般要2—3小时概论

70年代未，速率比浊计的出现，使抗原抗体结合的反应在几十秒内出结果，可以说是免疫化学测定的革命的发展随着标记技术的发展，免疫化学可以纳入临床化学检验范畴如今，自动化免疫分析系统更加飞速发展自动化免疫分析的基础是抗原抗体的结合，具有高特异性；手段多是利用标记技术而将检测信号放大，具有高灵敏度概论

流式细胞术06酶免疫分析技术05放射免疫分析技术04荧光免疫分析技术03化学发光、电发光分析技术02免疫比浊分析技术01自动化免疫仪器种类（应用技术）

利用抗原抗体结合后溶液的浊度变化而检测的一种方法此法准确快速，已成为免疫诊断技术中重要的检测手段比浊法与比色法免疫比浊

基本原理：抗原抗体复合物对一定波长的光产生折射、偏转，偏转角度及散射光强度与复合物粒子的大小和量有关（图）01Rayleigh散射（图）02Mile散射03Heidelberger曲线04散射免疫比浊分析法

01基本原理：免疫沉淀反应和散射比浊分析结合之技术，反应分两个阶段，预反应阶段和反应阶段（图）02保证抗原不过量的方法：确保反应体系抗体过量对抗原过量进行阈值限定定时散射比浊分析

定时散射比浊反应曲线图预反应阶段5ul样本抗原过剩区阈值信号反应阶段45ul样本7.5秒2分钟6分钟（2+4分钟）抗原不过量抗原过量

231基本原理：抗原抗体结合反应的一种动态测定法，适时检测抗原抗体复合物形成的散射光信号最快反应时间（图）抗原过量检测（图）速率散射比浊分析

峰值信号与抗原抗体反应之间的关系图散射光峰值CHIDA抗原浓度递增FBG

反应时间（秒）0100260038504散射率05抗体过量06抗原过量07第二峰值信号08抗原量检测速率峰值信号产生09

免疫透射比浊01基本原理：检测信号是通过溶液的光，测量角度与正前方夹角为0℃（图），保持抗体过量，形成可溶性AG-AB复合物，使介质浊度发生改变。01实验要求：选择亲和力高的抗体，抗原抗体复合物要大、数量要多，反应时间充分。01

单色器透射比浊计散射比浊计散射比浊和透射比浊的区别示意图θ透射光散射光散射光

胶乳浊度测定法A基本原理是：将抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒上，当遇到相应抗原时，则使胶乳颗粒发生凝集。单个胶乳颗粒在入射光波之内不阻碍光线透过，两个或两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过光减少，这种减少的程度与胶乳颗粒凝聚的程度呈正比，当然也与待测抗原量呈正比（图）B

3胶乳浊度测定法原理21λ光波54ddλ2d

影响免疫比浊的因素01抗原抗体比例抗体纯度和效价增聚剂（PEG）02

01校准程序，使仪器处于正常的工作状态02定标程序，保证检测结果的准确性03自动控制，保证实施实验条件中的抗原抗体反应体系要求04自动系统，障碍的检测和预警。自动免疫浊度分析仪的要求

2化学发光、电发光分析技术5酶免疫分析技术3荧光免疫分析技术6流式细胞术1免疫比浊分析技术4放射免疫分析技术自动化免疫仪器种类（应用技术）

No.3化学发光是指在化学反应过程中产生光的发射现象基本原理：标记在抗原或抗体上的发光物质在碱性介质中氧化时产生激发态的中间体，中间体回基态时产生辐射，多余的能量为发射光子，产生发光现象，再对光信号进行接收转化，可得检测物浓度发光物质须具备：氧化致发光、光量子产额高、理化性能好No.2No.1化学发光自动免疫分析

化学发光自动免疫分析类型化学发光免疫分析（CLIA）是一种用发光剂直接标记抗体的一类免疫分析法，用来标记的发光物必须能参与发光反应、标记和偶联后能稳定、理化性质和免疫特性不改变，多用吖啶酯类和苯酚类化合物。

化学发光自动免疫分析类型化学发光酶免疫分析（CLEIA）以催化反应的酶为标记物，抗原抗体结合后，其中的酶可对发光体系产生催化作用，产生发光效应。发光信号与抗原抗体的量成正比。多用的发光体系是HRP-鲁米诺。

微粒子化学发光免疫分析（ECIA）也是一种酶免疫分析，用磁珠作为固相载体，增加反应体积和分离效率。标记的酶多为ALP。0102化学发光自动免疫分析类型

电化学发光免疫分析（ECLIA）一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程,其中应用了“亲和素-生物素”放大系统，使检测的灵敏度大大提高以双抗体夹心法为例之图示（图）化学发光自动免疫分析类型

ECLIA体系结构图

ECLIA检测流程图一（双抗体夹心的形成）