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实验二十八荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量
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内转换S2S1S0T1吸收发射荧光发射磷光系间跨越3振动弛豫能量l2l1l3外转换l?2T2内转换振动弛豫
01掌握荧光分光光度法的基本原理02学会使用F-4500荧光分光光度计实验目的
二、方法原理利用荧光分析方法,测定能产生荧光的物质含量,对不能产生荧光的物质,可以利用某些具有能发生荧光基团的有机试剂,与非荧光物质形成较纯的荧光化合物,然后进行测定,是一种高灵敏度的分析方法。
01定性依据:02激发光光谱03荧光光谱04定量依据:05当?lc≦0.05时,将括号项近似处理后:06F=2.3?I0?lc=Kc
比较法:标准曲线法:配制一系列标准浓度试样测定荧光强度,绘制标准曲线,再在相同条件下测量未知试样的荧光强度,在标准曲线上求出浓度.在线性范围内,测定标样和试样的荧光强度,比较.定量方法
荧光仪器组成:激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。特殊点:有两个单色器,光源与检测器通常成直角。
用0.05mol/L硫酸溶液为参比溶液,用10mg/L的硫酸奎宁溶液作为测定液。固定荧光波长为443nm,从300nm到400nm,每间隔10nm测定一次荧光相对强度。以波长为横坐标,荧光相对强度为纵坐标,在坐标纸上绘出激发光谱图,指出最大激发波长λmax为345nm。12三、实验内容硫酸奎宁激发光谱的绘制
硫酸奎宁荧光光谱的绘制用10mg/L的硫酸奎宁溶液作为测定液。从380nm到600nm,每隔20nm测定一次荧光相对强度。以波长为横坐标,荧光相对强度为纵坐标,在坐标纸上绘出荧光光谱图,指出最大发射波长λmax为445nm。
直接比较法测定测定硫酸奎宁含量01式中:CX——待测液的浓度;CS—标准液的浓度;FX—待测液的荧光强度FS—标准液的荧光强度。02
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